镧对内毒素/脂多糖诱导的巨噬细胞核因子κB活化的抑制作用

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目的 了解稀土元素镧对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)核因子κB(NF-κB)活化的影响,并探讨其机制.方法 分离培养小鼠腹腔Mφ,分为:空白对照组,无刺激因素;LPS组,用1 μg/ml LPS刺激30 min;镧离子(La3+)组,用2.5 μmol/L La3+刺激30 min;La3++LPS组,先后用2.5 μmol/L La3+、1 μg/ml LPS各刺激30 min;La3+/LPS组,2.5 μmol/L La3+刺激30 min后,洗涤细胞,再加入1 μg/ml LPS刺激30 min.采用细胞免疫荧光染色法观察NF-κB在各组细胞中的分布与表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胞核中NF-κB/p65蛋白活性;蛋白质印迹法检测细胞核内NF-κB/p65蛋白及胞质中核因子抑制蛋白α(IκBα)的表达量.ELISA法测定各组细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 (1)免疫荧光染色显示,空白对照组、La3+组、La3++LPS组和La3+/LPS组Mφ绿色荧光多分布于胞质,胞核荧光强度分别为42±7、73±30、48±11和67±19;LPS组绿色荧光集中于胞核,荧光强度为116±14,明显高于其余4组(P<0.01).(2)胞核NF-κB/p65蛋白活性:LPS组吸光度值为0.435±0.066,与空白对照组(0.048±0.027)、La3+组(0.062±0.049)、La3++LPS组(0.066±0.031)、La3+/LPS组(0.108±0.017)比较,明显偏高(P<0.01).(3)LPS组Mφ胞核NF-κB/p65蛋白表达水平明显高于其余4组,胞质IκBα蛋白表达水平明显低于其余4组.(4)TNF-α含量:La3+组培养上清液中TNF-α含量低于试剂盒检测下限(25 pg/ml)及空白对照组(P<0.05),La3++LPS组和La3+/LPS组低于LPS组(P<0.01),但高于空白对照组.结论 LPS可激活小鼠腹腔MφNF-κB/p65核移位,并使胞核中NF-κB/p65的表达量和活性升高、胞质IκBα蛋白表达下调,导致TNF-α分泌增多.镧可抑制上述效应.
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