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摘要目的：观察VEGF、内皮素（ET-1）及C-myc在死于吸入窒息与肺透明膜病围产儿肺组织内的表达，探讨它们与肺组织缺氧性损伤的关系。方法：采用免疫组织化学方法，检测吸入窒息30例、肺透明膜病22例死亡患儿肺组织中VEGF、ET-1、C-myc三项指标的表达情况，并与其他非呼吸系统疾病死亡病例肺组织进行对照。结果：①对照组肺组织中VEGF、ET-1、C-myc阴性表达或仅在肺泡壁上皮细胞及肺泡壁毛细血管内皮细胞弱阳性表达。②在吸入窒息组和肺透明膜病组中C-myc、VEGF 则主要分布于肺泡壁上皮细胞，ET-1不但分布在肺泡壁上皮细胞和肺泡壁毛细血管内皮细胞，还分布于小动脉平滑肌与支气管上皮细胞。VEGF、ET-1、C-myc在吸入窒息组阳性率及肺透明膜病组阳性率,分别与正常肺组织相比都有显著性差异(P<0.05)。③吸入窒息与肺透明膜病三项指标的阳性率差别无显著性(P>0.05)。结论：VEGF、ET-1、C-myc与肺组织缺氧性损伤密切相关。
关键词 缺氧 VEGF、ET-1、C-myc围产儿 肺组织 免疫组织化学
资料与方法
材料：本实验标本来自新疆医科大学基础医学院病理教研室的围产儿尸体解剖肺组织标本，均经10%的中性福尔马林固定，石蜡包埋，对原切片复查，挑选死于吸入性窒息30例，死于新生儿肺透明膜病22例；其他非呼吸系统疾病死亡20例作为阴性对照，包括节段性坏死性肠炎5例，大面积脑出血6例，腹膜炎6例，外伤致死3例。
方法：研究用蜡块分别进行HE染色及免疫组化染色。免疫组化应用LSAB法。染色结果判断 VEGF、ET-1棕色颗粒表达在细胞浆内为阳性，C-myc棕色颗粒表达在细胞核内为阳性。
统计学分析：采用X2检验，检验水准α＝0.05。
结果
VEGF、C-myc染色结果：棕黄色颗粒定位于细胞核内。正常对照肺组织内，C-myc、p53免疫组织化学染色显示阴性或弱陽性；而吸入窒息及肺透明膜病患者的肺组织中，阳性率增加，棕黄色颗粒主要定位于肺泡上皮细胞的胞核中。
ET-1染色结果：棕黄色颗粒定位与细胞浆内。在正常对照肺组织中ET-1阴性表达或仅在肺泡壁毛细血管内皮细胞及肺泡壁上皮细胞胞浆中有弱阳性表达。在死于吸入性窒息及肺透明膜病患者的肺组织中表达部位：①肺泡壁毛细血管内皮细胞及肺泡壁上皮细胞胞浆；②小动脉、小静脉内皮细胞及小动脉壁平滑肌细胞胞浆；③细支气管上皮细胞胞浆。
VEGF、ET-1、C-myc在对照组、吸入性窒息肺透明膜病肺组织中的表达情况：20例正常肺组织中，VEGF、ET-1、C-myc 的阳性率分别为20.00%、25.00%、20.00%；而30例吸入性窒息肺组织中VEGF、ET-1、C-myc的阳性率分别为60.00%、70.00%、56.67%，与正常肺组织相比，差别具有显著性(P<0.05)。
VEGF、ET-1、C-myc在正常肺组织与肺透明膜病肺组织中表达的情况：在22例肺透明膜病肺组织中三项指标的阳性率为63.64%、72.73%、59.10%，与正常肺组织相比，有显著性差异(P<0.01)。
VEGF、ET-1、C-myc在吸入窒息与肺透明膜病肺组织中表达的关系：吸入窒息与肺透明膜病VEGF、ET-1、C-myc的阳性率及X2值,这三项指标的阳性表达率在两组之间差别无显著性(P>0.05)。
讨论
VEGF：缺血缺氧是表达的强烈诱导因素，是生理条件下和病理生理适应过程中血管生长的主要调节因子。在缺乏VHL作用的细胞中观察到mRNA的稳定性增加，这也是缺氧诱导表达量增加的机理之一。短时间的缺氧(3小时)可使表达量增加3～4倍，而持续性缺氧(15小时)可使表达水平提高8～10倍，这包括了转录水平增强和mRNA稳定性增加两方面的原因［1］。有研究显示：人内皮细胞在缺氧条件下产生是通过酪氨酸激酶途径转导的。更多的研究证实，缺氧诱导的表达还存在其他途径。国内外研究证实，在伴有血管增生的低氧性肺动脉高压肺血管重建的发生中发挥了重要的作用［2］。
ET-1：缺氧、酸中毒时ET水平升高，通过其强烈缩血管功能，可加重组织缺氧，形成恶性循环，特别是可直接引起肺血管和气道平滑肌强烈收缩，增强肺毛细血管静水压及微血管通透性，引起肺水肿［3］。本研究显示，ET-1在吸入窒息组及肺透明膜病组中阳性表达率增加，分别与正常对照相比有显著性差异（P<0.05）。阳性细胞分布范围扩大，不仅在肺泡壁毛细血管内皮细胞及肺泡壁上皮细胞表达阳性，而且在小动脉、小静脉内皮细胞，小动脉壁平滑肌细胞及细支气管上皮细胞内均有表达。表明ET-1与吸入窒息、肺透明膜病引起的肺组织缺氧密切相关。
C-myc：C-myc是目前研究最为深入的癌基因之一。由于C-myc对细胞生长增殖起调控作用，与细胞损伤后的修复过程及细胞内游离钙浓度有关。因此，C-myc基因一方面可影响缺血再灌注期间氧自由基生成以及细胞内钙的超载，再给氧期间，由于氧和能量的提供，损伤的细胞核和细胞膜以及其他细胞器开始修复。C-myc的阳性表达有可能就是细胞对损伤及修复的一种反应，C-myc就可能作为预示细胞对损伤产生保护和修复作用的一个指标［4］。本试验中，C-myc在吸入窒息和肺透明膜病的阳性率明显增高，与正常肺组织相比，差别有显著性。说明C-myc参与了吸入窒息和肺透明膜病中肺组织缺氧性损伤的过程，并与之密切相关。
本研究提示，ET-1、C-myc、VEGF在缺氧肺组织中异常高表达，在缺氧性损
伤中起重要作用，用免疫组织化学方法检测ET-1、C-myc、VEGF的表达，为围产儿肺缺氧性损伤的预防和临床治疗提供可靠的分子生物学依据。
参考文献
1 陈治，等.VEGF基因表达调控机制的研究进展.国外医学.生理、病理科学与临床分册，2000，20(3):190-192.
2 血管内皮因子受体在恶性肿瘤中的研究进展.现代肿瘤医学，2005，12（5）：151-154.
3 崔其亮，等.新生儿肺炎及缺氧、酸中毒与内皮素关系分析.中华儿童保健杂志，1998，6（1）：46-47.
4 康金朝，等.SD鼠未成熟心肌细胞缺氧/复氧期C-fox C-myc mRNA的表达.第四军医大学学报，2000，21（5）：586-588.
关键词 缺氧 VEGF、ET-1、C-myc围产儿 肺组织 免疫组织化学
资料与方法
材料：本实验标本来自新疆医科大学基础医学院病理教研室的围产儿尸体解剖肺组织标本，均经10%的中性福尔马林固定，石蜡包埋，对原切片复查，挑选死于吸入性窒息30例，死于新生儿肺透明膜病22例；其他非呼吸系统疾病死亡20例作为阴性对照，包括节段性坏死性肠炎5例，大面积脑出血6例，腹膜炎6例，外伤致死3例。
方法：研究用蜡块分别进行HE染色及免疫组化染色。免疫组化应用LSAB法。染色结果判断 VEGF、ET-1棕色颗粒表达在细胞浆内为阳性，C-myc棕色颗粒表达在细胞核内为阳性。
统计学分析：采用X2检验，检验水准α＝0.05。
结果
VEGF、C-myc染色结果：棕黄色颗粒定位于细胞核内。正常对照肺组织内，C-myc、p53免疫组织化学染色显示阴性或弱陽性；而吸入窒息及肺透明膜病患者的肺组织中，阳性率增加，棕黄色颗粒主要定位于肺泡上皮细胞的胞核中。
ET-1染色结果：棕黄色颗粒定位与细胞浆内。在正常对照肺组织中ET-1阴性表达或仅在肺泡壁毛细血管内皮细胞及肺泡壁上皮细胞胞浆中有弱阳性表达。在死于吸入性窒息及肺透明膜病患者的肺组织中表达部位：①肺泡壁毛细血管内皮细胞及肺泡壁上皮细胞胞浆；②小动脉、小静脉内皮细胞及小动脉壁平滑肌细胞胞浆；③细支气管上皮细胞胞浆。
VEGF、ET-1、C-myc在对照组、吸入性窒息肺透明膜病肺组织中的表达情况：20例正常肺组织中，VEGF、ET-1、C-myc 的阳性率分别为20.00%、25.00%、20.00%；而30例吸入性窒息肺组织中VEGF、ET-1、C-myc的阳性率分别为60.00%、70.00%、56.67%，与正常肺组织相比，差别具有显著性(P<0.05)。
VEGF、ET-1、C-myc在正常肺组织与肺透明膜病肺组织中表达的情况：在22例肺透明膜病肺组织中三项指标的阳性率为63.64%、72.73%、59.10%，与正常肺组织相比，有显著性差异(P<0.01)。
VEGF、ET-1、C-myc在吸入窒息与肺透明膜病肺组织中表达的关系：吸入窒息与肺透明膜病VEGF、ET-1、C-myc的阳性率及X2值,这三项指标的阳性表达率在两组之间差别无显著性(P>0.05)。
讨论
VEGF：缺血缺氧是表达的强烈诱导因素，是生理条件下和病理生理适应过程中血管生长的主要调节因子。在缺乏VHL作用的细胞中观察到mRNA的稳定性增加，这也是缺氧诱导表达量增加的机理之一。短时间的缺氧(3小时)可使表达量增加3～4倍，而持续性缺氧(15小时)可使表达水平提高8～10倍，这包括了转录水平增强和mRNA稳定性增加两方面的原因［1］。有研究显示：人内皮细胞在缺氧条件下产生是通过酪氨酸激酶途径转导的。更多的研究证实，缺氧诱导的表达还存在其他途径。国内外研究证实，在伴有血管增生的低氧性肺动脉高压肺血管重建的发生中发挥了重要的作用［2］。
ET-1：缺氧、酸中毒时ET水平升高，通过其强烈缩血管功能，可加重组织缺氧，形成恶性循环，特别是可直接引起肺血管和气道平滑肌强烈收缩，增强肺毛细血管静水压及微血管通透性，引起肺水肿［3］。本研究显示，ET-1在吸入窒息组及肺透明膜病组中阳性表达率增加，分别与正常对照相比有显著性差异（P<0.05）。阳性细胞分布范围扩大，不仅在肺泡壁毛细血管内皮细胞及肺泡壁上皮细胞表达阳性，而且在小动脉、小静脉内皮细胞，小动脉壁平滑肌细胞及细支气管上皮细胞内均有表达。表明ET-1与吸入窒息、肺透明膜病引起的肺组织缺氧密切相关。
C-myc：C-myc是目前研究最为深入的癌基因之一。由于C-myc对细胞生长增殖起调控作用，与细胞损伤后的修复过程及细胞内游离钙浓度有关。因此，C-myc基因一方面可影响缺血再灌注期间氧自由基生成以及细胞内钙的超载，再给氧期间，由于氧和能量的提供，损伤的细胞核和细胞膜以及其他细胞器开始修复。C-myc的阳性表达有可能就是细胞对损伤及修复的一种反应，C-myc就可能作为预示细胞对损伤产生保护和修复作用的一个指标［4］。本试验中，C-myc在吸入窒息和肺透明膜病的阳性率明显增高，与正常肺组织相比，差别有显著性。说明C-myc参与了吸入窒息和肺透明膜病中肺组织缺氧性损伤的过程，并与之密切相关。
本研究提示，ET-1、C-myc、VEGF在缺氧肺组织中异常高表达，在缺氧性损
伤中起重要作用，用免疫组织化学方法检测ET-1、C-myc、VEGF的表达，为围产儿肺缺氧性损伤的预防和临床治疗提供可靠的分子生物学依据。
参考文献
1 陈治，等.VEGF基因表达调控机制的研究进展.国外医学.生理、病理科学与临床分册，2000，20(3):190-192.
2 血管内皮因子受体在恶性肿瘤中的研究进展.现代肿瘤医学，2005，12（5）：151-154.
3 崔其亮，等.新生儿肺炎及缺氧、酸中毒与内皮素关系分析.中华儿童保健杂志，1998，6（1）：46-47.
4 康金朝，等.SD鼠未成熟心肌细胞缺氧/复氧期C-fox C-myc mRNA的表达.第四军医大学学报，2000，21（5）：586-588.