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【摘要】 目的 探究黄芪多糖对小鼠红细胞数及血红蛋白的影响。方法 取40只SPF级昆明小鼠随机分为4组，为高浓度组、中浓度组、低浓度组和蒸馏水组，通过直接喂食高浓度0.2g/kg、中浓度0.05g/kg、低浓度0.0125g/kg的黄芪多糖和蒸馏水5ml/kg，制备抗疲劳小鼠模型和对照组，喂养4周后，游泳力竭实验，进行小鼠负重游泳，检测小鼠血液中红细胞数和血红蛋白含量。结果 低、高剂量组小鼠游泳力竭时间明显比对照组延长；中、高剂量组小鼠血红蛋白含量较对照组升高。结论 一定浓度的黄芪多糖可以推迟小鼠疲劳出现的时间，可能与其增加血红蛋白含量有关。
【关键词】 黄芪多糖；力竭游泳；红细胞数；血红蛋白
文章编号：1004-7484（2013）-12-7071-02
疲劳是一种常见的有损于身体健康的生命现象，可独立引发临床疾病及慢性疲劳综合症等，因此已成为国内外关注的病症和研究的热点。多种中药具有抗疲劳及耐缺氧作用，现代药理学研究表明传统补益中药黄芪具有增强机体免疫功能、耐缺氧及应激能力，促进机体代谢，强心，降低血压，保护肝脏，调节血糖等药理作用[1-4]。其中有效成分即是黄芪多糖。因此，应用现代科学技术探讨黄芪作用机制，可使其更好地为人类服务。黄芪多糖是否具有增强机体运动负荷能力、抵抗疲劳产生的作用目前尚不明确。本研究即探讨黄芪多糖对小鼠的抗疲劳作用，测定小鼠血红细胞数及红蛋白含量的变化。
1 资料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂和仪器 黄芪多糖（纯度70%，批号：20130310，长沙骏宏生物科技有限公司）；血红蛋白试剂盒（南京建成生物研究所）；Morris水迷宫（西班牙Panlap公司生产，产自上海光谱仪器有限公司）；722型分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；红细胞计数板；光学显微镜；电子恒温不锈钢水浴锅（上海市南阳仪器有限公司）；压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；101-1AB型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；单道手动可调移液器（苏州百得实验室仪器有限公司）；JB760-68比色皿（江苏新力科技实业有限公司）。
1.1.2 动物 40只SPF级昆明小鼠，雄性，体重（22±2）g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，批号43004700000750，长沙医学院湖南省重点建设学科标准动物室饲养。
1.2 方法
1.2.1 动物给药及游泳力竭实验 40只SPF级昆明小鼠分两次实验，每次取小鼠20只，随机分为4个组，即对照空白组、黄芪多糖高、中、低剂量组，每组各为5只。空白组小鼠灌胃给予5ml/kg蒸馏水，黄芪多糖高、中、低剂量组小鼠分别灌胃给予0.2，0.05，0.0125g/kg黄芪多糖。每天一次，连灌28天，第28天给药后3h，在小鼠尾部缚大约为体重5%的铁丝，然后放入水深50cm、直径为50cm的Morris水迷宫内，水温维持在（35±1）℃，直至游泳力竭，力竭的时间根据从游泳实验开始直至沉入箱底后10s不浮出水面进行计算。第29天，无负重游泳30min，捞出小鼠擦干，30min后，摘眼球（并挤压心脏区域）取血，放入EP管中。测定运动后小鼠血中红细胞数和血红蛋白的含量。
1.2.2 红细胞计数 迅速吸取全血10ul，0.95g/100ml生理盐水稀释10000倍至100ml，取1至2滴在于盖好干燥盖玻片的红细胞计数板一端，在光学显微镜下记录红细胞数目，再根据以下公式计算红细胞总数。
红细胞数/mm3=4个大方格总数/4×100×稀释倍数
1.2.3 血红蛋白测定 迅速吸取全血10ul，蒸馏水稀释1000倍，按照试剂盒说明进行处置，于510nm光径下测定各管OD值。
血红蛋白（mg/ml）=126.03×（测定OD值-空白OD值）+3.5041。
1.3 统计学方法 采用SPSS19软件进行数据分析处理，数据以χ±s表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较方法采用LSD法，P<0.05有统计学意义。
2 结 果
2.1 游泳力竭实验 由表1可知，低剂量组与高剂量组小鼠的游泳力竭时间较对照空白组小鼠的游泳力竭时间明显延长（P<0.05），具有统计学意义。
2.2 黄芪多糖对小鼠红细胞数的影响 由表1可知，实验组小鼠的红细胞数量均数较对照空白组小鼠的红细胞数量有增多趋势，但无统计学意义。
2.3 黄芪多糖对血红蛋白量的影响 由表1可知，中剂量组与高剂量小鼠的血红蛋白含量较对照空白组小鼠的血红蛋白含量有明显升高趋势（P<0.05），其中以中剂量组最为显著（P<0.01），具有统计学意义。
3 讨 论
疲劳的最直接和最客观的表现是运动耐力的下降，而力竭游泳时间是反映运动耐力的重要指标[5]。實验结果表明，黄芪多糖可以延长大鼠负重游泳至力竭的时间，其中以低剂量组和高剂量组最为明显，与对照组比较有差异。实验证明，黄芪多糖可以提高小鼠的运动持久力。
用黄芪提取的有效成分黄芪多糖（≥70%），按不同剂量给小鼠连续灌胃4周，测量小鼠血红蛋白的含量和红细胞数目。结果表明，灌胃黄芪多糖可增加小白鼠血红蛋白的含量和红细胞数目，血红蛋白的含量有明显升高的趋势，以中剂量组最为明显，因而能显著增加小鼠每次呼吸对氧的利用程度[6]。由于黄芪多糖能增加Hb含量和红细胞数目，而血红蛋白是运输O2和CO2的主要分子，血红蛋白含量增高既有利于在剧烈运动中向肌组织提供更多的氧，加强有氧代谢供能，乳酸产生减少，同时加速乳酸的清除，还能及时将肌组织中产生的CO2转运到肺排出，避免由于pH下降造成的肌肉疲劳。这对延缓运动性疲劳的发生和加速疲劳的消除有积极作用[7]。
有关疲劳的研究已经不断深入，黄芪抗疲劳作用的机制也将被全面揭示，在临床应用等各领域也将有广阔的发展前景。
参考文献
[1] 王向荣，彭涛.黄芪多糖的免疫调节作用及其在动物生产上的应用[J].新研究，2008，2：46-48.
[2] 李彦东，范阔海，尉晓波.黄芪多糖在动物机体免疫中的作用[J].国外畜牧学，2009，29（4）：90-91.
[3] 金英子，张红英.复方黄苠水提取物对小鼠的耐缺氧和抗疲劳作用[J].延边大学医学学报，2007，30（2）：107.
[4] 石玉桂.黄芪多糖的主要作用及其在畜禽疾病防治中的应用[J].甘肃畜牧兽医，2009，4：36-37.
[5] 何来英，严卫星，楼密密，等.保健食品抗疲劳作用试验方法研究[J].中国食品卫生杂志，1997，9（4）：1.6.
[6] 王斌，张声华，李晓莉，等.人参总皂甙的耐缺氧效应机理研究[J].食品科学，2002，23（8）：270-272.
[7] 陈吉棣.运动营养学[M].北京：北京医科大学出版社，2002：33-37，298-301.
【关键词】 黄芪多糖；力竭游泳；红细胞数；血红蛋白
文章编号：1004-7484（2013）-12-7071-02
疲劳是一种常见的有损于身体健康的生命现象，可独立引发临床疾病及慢性疲劳综合症等，因此已成为国内外关注的病症和研究的热点。多种中药具有抗疲劳及耐缺氧作用，现代药理学研究表明传统补益中药黄芪具有增强机体免疫功能、耐缺氧及应激能力，促进机体代谢，强心，降低血压，保护肝脏，调节血糖等药理作用[1-4]。其中有效成分即是黄芪多糖。因此，应用现代科学技术探讨黄芪作用机制，可使其更好地为人类服务。黄芪多糖是否具有增强机体运动负荷能力、抵抗疲劳产生的作用目前尚不明确。本研究即探讨黄芪多糖对小鼠的抗疲劳作用，测定小鼠血红细胞数及红蛋白含量的变化。
1 资料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂和仪器 黄芪多糖（纯度70%，批号：20130310，长沙骏宏生物科技有限公司）；血红蛋白试剂盒（南京建成生物研究所）；Morris水迷宫（西班牙Panlap公司生产，产自上海光谱仪器有限公司）；722型分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；红细胞计数板；光学显微镜；电子恒温不锈钢水浴锅（上海市南阳仪器有限公司）；压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；101-1AB型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；单道手动可调移液器（苏州百得实验室仪器有限公司）；JB760-68比色皿（江苏新力科技实业有限公司）。
1.1.2 动物 40只SPF级昆明小鼠，雄性，体重（22±2）g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，批号43004700000750，长沙医学院湖南省重点建设学科标准动物室饲养。
1.2 方法
1.2.1 动物给药及游泳力竭实验 40只SPF级昆明小鼠分两次实验，每次取小鼠20只，随机分为4个组，即对照空白组、黄芪多糖高、中、低剂量组，每组各为5只。空白组小鼠灌胃给予5ml/kg蒸馏水，黄芪多糖高、中、低剂量组小鼠分别灌胃给予0.2，0.05，0.0125g/kg黄芪多糖。每天一次，连灌28天，第28天给药后3h，在小鼠尾部缚大约为体重5%的铁丝，然后放入水深50cm、直径为50cm的Morris水迷宫内，水温维持在（35±1）℃，直至游泳力竭，力竭的时间根据从游泳实验开始直至沉入箱底后10s不浮出水面进行计算。第29天，无负重游泳30min，捞出小鼠擦干，30min后，摘眼球（并挤压心脏区域）取血，放入EP管中。测定运动后小鼠血中红细胞数和血红蛋白的含量。
1.2.2 红细胞计数 迅速吸取全血10ul，0.95g/100ml生理盐水稀释10000倍至100ml，取1至2滴在于盖好干燥盖玻片的红细胞计数板一端，在光学显微镜下记录红细胞数目，再根据以下公式计算红细胞总数。
红细胞数/mm3=4个大方格总数/4×100×稀释倍数
1.2.3 血红蛋白测定 迅速吸取全血10ul，蒸馏水稀释1000倍，按照试剂盒说明进行处置，于510nm光径下测定各管OD值。
血红蛋白（mg/ml）=126.03×（测定OD值-空白OD值）+3.5041。
1.3 统计学方法 采用SPSS19软件进行数据分析处理，数据以χ±s表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较方法采用LSD法，P<0.05有统计学意义。
2 结 果
2.1 游泳力竭实验 由表1可知，低剂量组与高剂量组小鼠的游泳力竭时间较对照空白组小鼠的游泳力竭时间明显延长（P<0.05），具有统计学意义。
2.2 黄芪多糖对小鼠红细胞数的影响 由表1可知，实验组小鼠的红细胞数量均数较对照空白组小鼠的红细胞数量有增多趋势，但无统计学意义。
2.3 黄芪多糖对血红蛋白量的影响 由表1可知，中剂量组与高剂量小鼠的血红蛋白含量较对照空白组小鼠的血红蛋白含量有明显升高趋势（P<0.05），其中以中剂量组最为显著（P<0.01），具有统计学意义。
3 讨 论
疲劳的最直接和最客观的表现是运动耐力的下降，而力竭游泳时间是反映运动耐力的重要指标[5]。實验结果表明，黄芪多糖可以延长大鼠负重游泳至力竭的时间，其中以低剂量组和高剂量组最为明显，与对照组比较有差异。实验证明，黄芪多糖可以提高小鼠的运动持久力。
用黄芪提取的有效成分黄芪多糖（≥70%），按不同剂量给小鼠连续灌胃4周，测量小鼠血红蛋白的含量和红细胞数目。结果表明，灌胃黄芪多糖可增加小白鼠血红蛋白的含量和红细胞数目，血红蛋白的含量有明显升高的趋势，以中剂量组最为明显，因而能显著增加小鼠每次呼吸对氧的利用程度[6]。由于黄芪多糖能增加Hb含量和红细胞数目，而血红蛋白是运输O2和CO2的主要分子，血红蛋白含量增高既有利于在剧烈运动中向肌组织提供更多的氧，加强有氧代谢供能，乳酸产生减少，同时加速乳酸的清除，还能及时将肌组织中产生的CO2转运到肺排出，避免由于pH下降造成的肌肉疲劳。这对延缓运动性疲劳的发生和加速疲劳的消除有积极作用[7]。
有关疲劳的研究已经不断深入，黄芪抗疲劳作用的机制也将被全面揭示，在临床应用等各领域也将有广阔的发展前景。
参考文献
[1] 王向荣，彭涛.黄芪多糖的免疫调节作用及其在动物生产上的应用[J].新研究，2008，2：46-48.
[2] 李彦东，范阔海，尉晓波.黄芪多糖在动物机体免疫中的作用[J].国外畜牧学，2009，29（4）：90-91.
[3] 金英子，张红英.复方黄苠水提取物对小鼠的耐缺氧和抗疲劳作用[J].延边大学医学学报，2007，30（2）：107.
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[5] 何来英，严卫星，楼密密，等.保健食品抗疲劳作用试验方法研究[J].中国食品卫生杂志，1997，9（4）：1.6.
[6] 王斌，张声华，李晓莉，等.人参总皂甙的耐缺氧效应机理研究[J].食品科学，2002，23（8）：270-272.
[7] 陈吉棣.运动营养学[M].北京：北京医科大学出版社，2002：33-37，298-301.