【摘 要】
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利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对HepG2
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室,天津,300020;天津一瑞生物科技股份有限公司,天津,300020
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利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对HepG2肝癌原位移植瘤的抑制作用.以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体pGL3-basic及慢病毒表达载体pLentiR.ILZ-sTRAlL、pLen-tiR.CopGFP为基础,采用PCR、酶切、连接的方法构建AFP启动子特异性驱动TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的载体pLentiR.AFPILZ-sTRAIL及其对照载体pLentiR.AFPCopGFP.利用双荧光素酶法检测HepG2、MCF-7和3T3细胞中AFP启动子的特异性活性;利用慢病毒感染的方法将HUMSCs标记AFP启动子驱动的Luc(MSC.AFPILZ-sTRAIL),建立Balb/c裸鼠的HepG2肝癌原位移植瘤模型.应用MSC.AFPILZ-sTRAIL与5-FU联合进行治疗,利用Western blot检测ILZ-sTRAIL蛋白于肿瘤部位的表达,并于治疗后对肝脏中的肿瘤进行测量,同时眼眶取血检测血浆中谷氨酸转氨酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的表达水平.结果 表明,成功构建了报告基因载体pGL3-AFP、慢病毒表达载体pLentiR.AFPILZ-sTRAIL及pLentiR.AFPCopGFP,测序正确.AFP启动子在HepG2细胞中的相对活性为49.05％ ±5.47％,由AFP启动子调控表达ILZ-sTRAIL基因的慢病毒可有效的感染HUMSCs.成功建立了Balb/c裸鼠的HepG2肝癌原位移植瘤模型,ILZ-sTRAIL蛋白能特异的表达于肿瘤部位.MSC.AFPILZ-sTRAIL+ 5-FU组的肿瘤体积明显小于PBS组(P＜0.01),并且效果强于MSC.AFPILZ-sTRAIL单独治疗组;MSC.AFPILZ-sTRAIL+ 5-FU组可见肿瘤细胞固缩、坏死,并有不同程度的淋巴细胞浸润.MSC.AFPILZ-sTRAIL+ 5-FU组裸鼠血浆中ALT和AST的表达水平较对照组显著下降,其中ALT下降的更为明显(ALT,P＜0.01;AST,P＜0.05).这一调控性治疗模式与5-FU联合应用在肝癌原位治疗中取得了良好的治疗效果,为肝癌的基因治疗和临床化疗提供了新思路.
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