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摘要：目的：探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法 采用3MP检测法对362 PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和治疗病例进行回顾性分析。结果 回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为51.3%，病程为（4.5±2.6）天;PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.2±3.5）天;MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。
关键词：肺炎支原体;快速培养法;咽拭子聚合酶链反应;血清抗体
1.1 样本
收集资阳市第一人民医院检验科2013年1月1日～12月6日在我院就诊住院患儿病例，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿362例作为研究对象，其中男175例，女187例;年龄为2个月～12岁，病程为1～90天。
1.2 方法
具体方法有：（1）用MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测，记录结果。（2）通过研究对象病历回顾统计MP感染的例数，并按年龄、病程和3种MP检测法结果进行统计学分析。
1.3 临床诊断MP感染的诊断标准
按文献[1]、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断——即患儿经红霉素治疗有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等;以及实验室检查3种检测法至少有一种阳性。病程计算方法：以病历本记录为准，即在患儿开始有症状或体征时开始计算，到患儿来就诊检测时为止进行计算。
1.4 MP快速培养法
支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽拭子用无菌生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37 ℃培养;培养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时，瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性，5天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR法：试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR法检测MP-DNA，严格按试剂盒说明书进行，以在紫外灯下出现180 bp扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照（阳性对照为MP质粒，阴性对照为无菌生理盐水），由专人进行操作，质量控制。MP-Ab法：试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab检测试剂SERODIA-MYCOⅡ凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书操作，抽取患儿静脉血3 ml，采用明胶颗粒被动凝集法，用血清检测，结果以≥1∶40判断为阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒和阳性、阴性血清进行测定。
结果分析 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。
1.讨论
1 MP感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与一般病毒性感冒相混淆。在临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓性痰，偶带血丝。（2）可有咽痛、头痛、胸痛，全身症状比体征明显。（3）肺部体征不典型而胸片炎症显著，可见云雾状大片阴影。（4）WBC正常或升高。（5）青霉素类、磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗生素有效。
2 近年来由于诊断技术的提高，MP感染报道日渐增多，一般认为MP感染以年长儿发病较多，本文表1资料显示，2～8岁年龄段是发病的高峰期[2]。占同期呼吸免疫科住院患儿的9.3%，比有关文献报道各年龄组支原体肺炎占肺炎发病的10%～20%低。说明MP感染的发病年龄有提前，且年龄越小，临床表现愈不典型。
3临床实验室检测MP的方法很多，过去所用的冷凝集试验法诊断MP感染缺乏特异性，敏感性也差，易受病程的影响[3]。本文采用配对资料研究，对疑为MP感染的患儿进行3种MP检测法，以探讨MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等方法在儿童支原体肺炎诊断治疗过程中的敏感性。提示临床医生根据患儿不同的病程选取不同的检测方法，以提高实验室的阳性检出率。
4 MP快速培养法是利用MP生长代谢产物使培养基液体中指示剂颜色发生改变来判断MP生长;标本中的其他支原体和细菌则因培养基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。该法阳性结果可48 h检出。结果显示，培养法阳性率为51.3%（78/152），低于另外两种方法的阳性率。可能与在检测前患儿已经用了MP敏感药物有关。表2结果显示，该法阳性病例病程最短。提示病程时间较短的患儿选择此方法对检测的阳性率较高。MP培养是诊断MP的金标准[4]。
5 咽拭子PCR法检测质粒核酸，该法快速、敏感和特异，通过一技术可从患儿痰中检测MP-DNA。由于此方法相当敏感，易受污染，故实验室操作时应特别小心。统计结果显示，该法的阳性率为67.76%（103/152），高于快培法。此法弥补了极微量的和被药物杀死的MP不能通过快速培养法检出的病例。表2结果显示，该法阳性病例，病程为（6.2±3.5）天。详细资料显示，有病程在30天以上的患儿经抗MP治疗，该法仍可为阳性，说明MP的生存力相当强，要系统化治疗。
2.结 论
临床应根据患儿的不同病程、不同年龄以及用药情况来选取实验室的检测方法，以提高MP的阳性检测率，以更好地结合临床症状进行综合分析，从而提高小儿MP感染诊断的准确率。
参考文献：
[1]檀卫平.聚合酶链反应及血清学检测在肺炎支原体感染诊断中的意义.广东医学，1996，17（4）：218.
[2]陆定，陆诗强，庄丽宝，等.肺炎支原体引起小儿上呼吸道感染的临床研究.中国当代儿科杂志，2006，8（3）：205-206.
[3]杨莉.小儿肺炎支原体感染的早期诊断.南京铁道医学院学报，1997，16（2）：116.
[4]周金凤，黄秀琼.1362例呼吸道感染患者痰、咽拭子肺炎支原体培养结果分析.现代医院，2006，6（6）：86-87.
关键词：肺炎支原体;快速培养法;咽拭子聚合酶链反应;血清抗体
1.1 样本
收集资阳市第一人民医院检验科2013年1月1日～12月6日在我院就诊住院患儿病例，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿362例作为研究对象，其中男175例，女187例;年龄为2个月～12岁，病程为1～90天。
1.2 方法
具体方法有：（1）用MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测，记录结果。（2）通过研究对象病历回顾统计MP感染的例数，并按年龄、病程和3种MP检测法结果进行统计学分析。
1.3 临床诊断MP感染的诊断标准
按文献[1]、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断——即患儿经红霉素治疗有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等;以及实验室检查3种检测法至少有一种阳性。病程计算方法：以病历本记录为准，即在患儿开始有症状或体征时开始计算，到患儿来就诊检测时为止进行计算。
1.4 MP快速培养法
支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽拭子用无菌生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37 ℃培养;培养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时，瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性，5天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR法：试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR法检测MP-DNA，严格按试剂盒说明书进行，以在紫外灯下出现180 bp扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照（阳性对照为MP质粒，阴性对照为无菌生理盐水），由专人进行操作，质量控制。MP-Ab法：试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab检测试剂SERODIA-MYCOⅡ凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书操作，抽取患儿静脉血3 ml，采用明胶颗粒被动凝集法，用血清检测，结果以≥1∶40判断为阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒和阳性、阴性血清进行测定。
结果分析 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。
1.讨论
1 MP感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与一般病毒性感冒相混淆。在临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓性痰，偶带血丝。（2）可有咽痛、头痛、胸痛，全身症状比体征明显。（3）肺部体征不典型而胸片炎症显著，可见云雾状大片阴影。（4）WBC正常或升高。（5）青霉素类、磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗生素有效。
2 近年来由于诊断技术的提高，MP感染报道日渐增多，一般认为MP感染以年长儿发病较多，本文表1资料显示，2～8岁年龄段是发病的高峰期[2]。占同期呼吸免疫科住院患儿的9.3%，比有关文献报道各年龄组支原体肺炎占肺炎发病的10%～20%低。说明MP感染的发病年龄有提前，且年龄越小，临床表现愈不典型。
3临床实验室检测MP的方法很多，过去所用的冷凝集试验法诊断MP感染缺乏特异性，敏感性也差，易受病程的影响[3]。本文采用配对资料研究，对疑为MP感染的患儿进行3种MP检测法，以探讨MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等方法在儿童支原体肺炎诊断治疗过程中的敏感性。提示临床医生根据患儿不同的病程选取不同的检测方法，以提高实验室的阳性检出率。
4 MP快速培养法是利用MP生长代谢产物使培养基液体中指示剂颜色发生改变来判断MP生长;标本中的其他支原体和细菌则因培养基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。该法阳性结果可48 h检出。结果显示，培养法阳性率为51.3%（78/152），低于另外两种方法的阳性率。可能与在检测前患儿已经用了MP敏感药物有关。表2结果显示，该法阳性病例病程最短。提示病程时间较短的患儿选择此方法对检测的阳性率较高。MP培养是诊断MP的金标准[4]。
5 咽拭子PCR法检测质粒核酸，该法快速、敏感和特异，通过一技术可从患儿痰中检测MP-DNA。由于此方法相当敏感，易受污染，故实验室操作时应特别小心。统计结果显示，该法的阳性率为67.76%（103/152），高于快培法。此法弥补了极微量的和被药物杀死的MP不能通过快速培养法检出的病例。表2结果显示，该法阳性病例，病程为（6.2±3.5）天。详细资料显示，有病程在30天以上的患儿经抗MP治疗，该法仍可为阳性，说明MP的生存力相当强，要系统化治疗。
2.结 论
临床应根据患儿的不同病程、不同年龄以及用药情况来选取实验室的检测方法，以提高MP的阳性检测率，以更好地结合临床症状进行综合分析，从而提高小儿MP感染诊断的准确率。
参考文献：
[1]檀卫平.聚合酶链反应及血清学检测在肺炎支原体感染诊断中的意义.广东医学，1996，17（4）：218.
[2]陆定，陆诗强，庄丽宝，等.肺炎支原体引起小儿上呼吸道感染的临床研究.中国当代儿科杂志，2006，8（3）：205-206.
[3]杨莉.小儿肺炎支原体感染的早期诊断.南京铁道医学院学报，1997，16（2）：116.
[4]周金凤，黄秀琼.1362例呼吸道感染患者痰、咽拭子肺炎支原体培养结果分析.现代医院，2006，6（6）：86-87.