论文部分内容阅读
摘 要 采用H2SO4、NaOH、GA3和2，4-D四种处理方法，研究不同因素不同处理方法对七叶一枝花种子发芽率的影响。结果表明，4种方法对七叶一枝花平均发芽率有显著影响，并不同程度缩短种子萌动时间。其中50% H2SO4处理3 s最高发芽率为16.7%，萌动时间为120 d；10% NaOH处理30 min平均发芽率为23.3%，萌动时间为100 d； GA3 2 500 mg/L处理48 h平均发芽率为50%，萌动时间为53 d；2，4-D 20 mg/L处理72 h 平均發芽率为53.3%，种子萌动时间为105 d。
关键词 七叶一枝花 ；发芽率 ；赤霉素 ；2，4-氯苯氧乙酸
中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2019.02.005
Abstract Seeds of Paris polyphylla were treated with four chemicals （H2SO4， NaOH， GA3 and 2，4-D） for different hours to observe their germination rates. The results showed that these 4 chemicals had significant effects on the average germination rate and shortened the seed germination time to different extents. The seeds treated with 50% H2SO4 for 3 s gave an average germination rate of 16.7%， and started their germination on day 120. The seeds treated with 10% NaOH for 30min had an average germination rate of 23.3%， and started their germination on day 100. The seeds treated with GA3 2500 ppm for 48 h had an average germination rate of 50%， and began to germinate on day 53. The seeds treated with 2，4-D 20 mg/L for 72 h had an average germination rate of 53.3%， and commenced to germination on day 105.
Keywords Paris polyphylla ； average germination rate ； GA3 ； 2，4-D
七叶一枝花（Paris polyphylla），别名蚤休、紫河车、草河车、华重楼、七叶莲、铁灯台等，百合科重楼属多年生草本植物，属珍稀濒危植物，在我国浙江、江苏、江西、福建、安徽、湖北、四川、云南、广西、贵州等地均有分布[1-2]。具有清热解毒[3]、消肿止痛[4]、凉肝定惊之功效[5]，七叶一枝花除了是云南白药季德胜蛇药片、宫血宁胶囊的主要药用成分之一之外[6-8]，它还广泛用于多种中药制剂中，如抗病毒颗粒、抗病毒冲剂、红药、热毒清等重要中成药，七叶一枝花作为抗肿瘤药和妇科用药的开发也具有良好的前景[9-11]。
七叶一枝花的种子发芽周期长，发芽率低，且种子具有休眠性，影响七叶一枝花种子萌发的因素有温度、光照、内源激素、外源生长调节剂、超声波、紫外线等。对七叶一枝种子的育苗因素研究比较少[12-13]，利用有效的因素缩短七叶一枝花种子发芽周期和提高发芽率，是七叶一枝花产业的当务之急。本文对七叶一枝花种子进行不同因素试验研究，探索影响七叶一枝花的发芽的因子，为七叶一枝花的生产种植提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
七叶一枝花种子、培养皿、纱布、光照培养箱、H2SO4、NaOH、GA3、2，4-D、50%多菌灵、纯净水。
1.2 方法
1.2.1 种子预处理
2015年9～10月，选5年生以上植株所结的饱满成熟变红果实，用网袋搓去果皮，洗净，在太阳下晒2～3 d，挑出不饱满的种子后装到密封袋中，排除空气，4℃冰箱保存。2016年3月份挑选饱满七叶一枝花种子进行如下处理试验。
1.2.2 H2SO4对七叶一枝花种子发芽率的影响
采用50% H2SO4（V/V）处理七叶一枝花种子，共5个水平，分别浸泡3、15、30、60 s和2 min。
1.2.3 NaOH对七叶一枝花种子发芽率的影响
不同浓度NaOH和时间处理七叶一枝花种子，采用10%和30%的NaOH各处理15、30、45、60 min，共8个水平。
1.2.4 GA3对七叶一枝花种子发芽率的影响
不同浓度GA3和时间处理七叶一枝花种子，分别采用10、100、200、500、1 000和2 500 mg/mL的GA3处理48 h；2 500 mg/mL处理24 h；5 000 mg/mL处理24和48 h，共9个水平。
1.2.5 2，4-D对七叶一枝花种子发芽率的影响
不同浓度2，4-D和处理时间处理七叶一枝花种子，采用2，4-D 0.5、1、2、20 mg/L 4个浓度，分别处理24、48、72 h，共12个处理水平。
1.2.6 培养条件
每个水平用种量30粒，3次重复。CK采用纯净水浸泡48 h。上述不同处理后立即用纯净水冲洗3次，然后处理好的种子用50%的多菌灵浸泡10 min，然后用纯净水冲洗干净后放置有湿纱布的培养皿中，放置在23℃，65%湿度恒温培养，定期观察，并及时补充纯净水，忌浇水太多。 1.2.7 数据统计与分析
记录种子萌发情况，以胚根（或胚芽）开始膨大突破种皮视为萌动，记录萌动时间，培养180 d统计种子萌发数，以胚根（或胚芽）长度≥5 mm视为萌发，种子萌发率（%）为萌发种子数占全部种子数的质量分数。采用SPSS 19.0对数据进行方差分析和多重比较S-N-K检验。
2 结果和分析
2.1 H2SO4对七叶一枝花种子发芽率的影响
从表1可知，50%（V/V）H2SO4对七叶一枝花平均发芽率影响显著。处理1的平均发芽率极最高为16.7%，极显著（p≤0.01）高于处理2、3、4、5。50%H2SO4缩短了种子萌动时间30 d，平均发芽率除了处理1比CK提高了3.4%，其他处理均比CK低；并且随着时间的增加，平均发芽率从16.7%逐渐较少到0。
2.2 NaOH对七叶一枝花种子发芽率的影响
从下表2可知，采用不同浓度NaOH和不同处理时间对七叶一枝花种子平均发芽率的影响达极显著。七叶一枝花种子萌动时间基本在100～110 d，比对照CK缩短了40～50 d；平均发芽率最高的处理1和处理2为23.3%，比对照CK增加10%，极显著高于其他处理和CK；最差的处理8为0；相同时间处理，10% NaOH比30% NaOH平均发芽率要高，而两种浓度NaOH随着浸泡时间的增加，七叶一枝花种子平均发芽率逐渐降低。
2.3 GA3对七叶一枝花种子发芽率的影响
从表3可知，GA3对七叶一枝花种子平均发芽率的影响显著。处理6平均发芽率最高为50.0%，比CK提高了36.7%，种子萌动时间为53 d，比CK减少了97 d；同时可以看到随着GA3浓度的增加，种子萌动时间逐渐减少，而平均发芽率随着浓度的增加，平均发芽率逐渐增加到处理6的50%后又逐渐减少。
2.4 2，4-D对七叶一枝花种子发芽率的影响
从下表4可知，2，4-D对七叶一枝花种子平均发芽率的影响显著。处理12平均发芽率最高为53.3%，比CK提高了40%，种子萌动时间为105 d，比CK减少了45 d；平均发芽率最低为16.7%，比CK仅多了3.4%，种子萌动时间比CK少了32 d；2，4-D的4种浓度均随这七叶一枝花浸泡时间的增加种子萌动时间增长，平均发芽率没有规律变化。
3 讨论
适当浓度的H2SO4处理七叶一枝花种子，种子发芽率提高不理想，并且随着处理时间加长，发芽率逐渐降低，主要原因是H2SO4破环了种皮，导致七叶一枝花种子被霉菌感染的几率增加而引发种子失活。所以在实际生产上不建议用化学或者物理方法破坏七叶一枝花的种皮，致使种子污染率增加。
NaOH影响七叶一枝花种子发芽率和萌动时间，采用10% NaOH处理种子10～15 min可以提高发芽率至23.3%，种子萌动时间缩短至100 d；增加NaOH的浓度和处理时间，会使种子发芽率降低，主要原因和H2SO4一样，种子种皮被破坏，增加了霉菌感染几率。所以在七叶一枝花实际生产上，适当pH的碱性土壤有利于提高种子发芽率。
GA3对七叶一枝花种子平均发芽率的影响比较明显，显著提高种子发芽率和缩短种子萌动时间，这与王艳芳等赤霉素處理可提高滇重楼种子发根率和发根速度的研究结果一致[14]， 苏海兰等[15]研究表明，随着发芽时间增长，GA3种子含量逐渐增加。其中处理6平均发芽率最高为50.0%，种子萌动时间为53 d；种子随GA3浓度的增加萌动时间逐渐较少，从92 d减少到53 d；种子平均发芽率随着GA3浓度和时间的增加显现先增加后减少的结果。说明在七叶一枝花种子发芽过程中GA3具有促进种子发芽的作用，而后期出现的平均发芽率减少是过高的GA3浓度抑制了种子的发芽。
2，4-D对七叶一枝花种子平均发芽率的影响比较显著，它能提高种子发芽率，不能显著较少种子萌动时间。采用20 mg/L浸泡72 h处理平均发芽率可达53.3%，而种子萌动时间为105 d，高于宋发军用2，4-D诱导滇重楼种子，种子萌发率为37.9%[16]；随着种子浸泡2，4-D时间的增加，增加了种子萌动时间；2，4-D浓度和时间的变化，平均发芽率呈不规律变化。
七叶一枝花种子发芽一个复杂的过程，外部的培养条件改变、内源激素的变化、内源酶的变化等条件都会影响种子的发芽，利用有效的因素缩短七叶一枝花种子发芽周期和提高发芽率，探索出一个最佳育苗方案是发展七叶一枝花产业的当务之急，所以，对七叶一枝花育苗还需要做大量科研工作。
参考文献
[1] 龚范武，罗先权，王 萍，等. 七叶一枝花种子育苗技术研究[J]. 湖南林业科技， 2014（01）： 50-53.
[2] 汤海峰，赵越平，蒋永培. 重楼属植物的研究概况[J]. 中草药， 1998（12）： 839-842.
[3] 张 珏，王跃华，杨 华，等. 华重楼研究现状[J]. 时珍国医国药， 2013（01）： 196-198.
[4] 李小莉，陈红琳，牟光敏. 七叶一枝花软膏抗炎镇痛作用研究[J]. 医药导报， 2007（02）： 139-140.
[5] 马传江，逯 双，曹广尚，等. 七叶一枝花繁育技术研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志， 2016（18）： 192-196.
[6] 王丽萍，起学伟. 云南重楼野生驯化及栽培技术研究初探[J]. 中国野生植物资源，2002（01）： 62-63.
[7] 王 岚，陈仕学，姚元勇. 梵净山七叶一枝花总黄酮含量测定[J]. 安徽农学通报，2013（20）： 25-28.
[8] 边洪荣，李小娜，王会敏. 重楼的研究及应用进展[J]. 中药材， 2002（03）： 218-220.
[9] 武珊珊，高文远，段宏泉，等. 重楼化学成分和药理作用研究进展[J]. 中草药，2004（03）： 110-113.
[10] 鹿洪秀，马德东. 七叶一枝花提取物抗肿瘤生长及转移的作用[J]. 山东医药，2013（45）： 33-34.
[11] 齐建红. 七叶一枝花的药学及临床应用研究进展[J]. 园艺与种苗， 2012（01）： 69-72.
[12] 王艳芳，李 戈，唐 玲，等. 滇重楼种子萌发过程观察及出苗影响因素研究[J]. 中药材， 2017（09）： 2 022-2 025.
[13] 陈 翠，杨丽云，吕丽芬，等. 云南重楼种子育苗技术研究[J]. 中国中药杂志，2007（19）： 1 979-1 983.
[14] 王艳芳，唐 玲，李荣英，等. 影响滇重楼种子萌发及胚根生长因素的研究[J]. 云南中医学院学报， 2012（2）： 28-31.
[15] 苏海兰，周先治，李 希，等. 七叶一枝花种子萌发不同阶段生理生化变化研究[J]. 中草药， 2017（22）： 4 755-4 763.
[16] 宋发军，罗 忠，黄 珍，等. 赤霉素处理对重楼种子萌发相关生理指标的影响[J]. 中南民族大学学报（自然科学版），2016（3）： 30-34.
关键词 七叶一枝花 ；发芽率 ；赤霉素 ；2，4-氯苯氧乙酸
中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2019.02.005
Abstract Seeds of Paris polyphylla were treated with four chemicals （H2SO4， NaOH， GA3 and 2，4-D） for different hours to observe their germination rates. The results showed that these 4 chemicals had significant effects on the average germination rate and shortened the seed germination time to different extents. The seeds treated with 50% H2SO4 for 3 s gave an average germination rate of 16.7%， and started their germination on day 120. The seeds treated with 10% NaOH for 30min had an average germination rate of 23.3%， and started their germination on day 100. The seeds treated with GA3 2500 ppm for 48 h had an average germination rate of 50%， and began to germinate on day 53. The seeds treated with 2，4-D 20 mg/L for 72 h had an average germination rate of 53.3%， and commenced to germination on day 105.
Keywords Paris polyphylla ； average germination rate ； GA3 ； 2，4-D
七叶一枝花（Paris polyphylla），别名蚤休、紫河车、草河车、华重楼、七叶莲、铁灯台等，百合科重楼属多年生草本植物，属珍稀濒危植物，在我国浙江、江苏、江西、福建、安徽、湖北、四川、云南、广西、贵州等地均有分布[1-2]。具有清热解毒[3]、消肿止痛[4]、凉肝定惊之功效[5]，七叶一枝花除了是云南白药季德胜蛇药片、宫血宁胶囊的主要药用成分之一之外[6-8]，它还广泛用于多种中药制剂中，如抗病毒颗粒、抗病毒冲剂、红药、热毒清等重要中成药，七叶一枝花作为抗肿瘤药和妇科用药的开发也具有良好的前景[9-11]。
七叶一枝花的种子发芽周期长，发芽率低，且种子具有休眠性，影响七叶一枝花种子萌发的因素有温度、光照、内源激素、外源生长调节剂、超声波、紫外线等。对七叶一枝种子的育苗因素研究比较少[12-13]，利用有效的因素缩短七叶一枝花种子发芽周期和提高发芽率，是七叶一枝花产业的当务之急。本文对七叶一枝花种子进行不同因素试验研究，探索影响七叶一枝花的发芽的因子，为七叶一枝花的生产种植提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
七叶一枝花种子、培养皿、纱布、光照培养箱、H2SO4、NaOH、GA3、2，4-D、50%多菌灵、纯净水。
1.2 方法
1.2.1 种子预处理
2015年9～10月，选5年生以上植株所结的饱满成熟变红果实，用网袋搓去果皮，洗净，在太阳下晒2～3 d，挑出不饱满的种子后装到密封袋中，排除空气，4℃冰箱保存。2016年3月份挑选饱满七叶一枝花种子进行如下处理试验。
1.2.2 H2SO4对七叶一枝花种子发芽率的影响
采用50% H2SO4（V/V）处理七叶一枝花种子，共5个水平，分别浸泡3、15、30、60 s和2 min。
1.2.3 NaOH对七叶一枝花种子发芽率的影响
不同浓度NaOH和时间处理七叶一枝花种子，采用10%和30%的NaOH各处理15、30、45、60 min，共8个水平。
1.2.4 GA3对七叶一枝花种子发芽率的影响
不同浓度GA3和时间处理七叶一枝花种子，分别采用10、100、200、500、1 000和2 500 mg/mL的GA3处理48 h；2 500 mg/mL处理24 h；5 000 mg/mL处理24和48 h，共9个水平。
1.2.5 2，4-D对七叶一枝花种子发芽率的影响
不同浓度2，4-D和处理时间处理七叶一枝花种子，采用2，4-D 0.5、1、2、20 mg/L 4个浓度，分别处理24、48、72 h，共12个处理水平。
1.2.6 培养条件
每个水平用种量30粒，3次重复。CK采用纯净水浸泡48 h。上述不同处理后立即用纯净水冲洗3次，然后处理好的种子用50%的多菌灵浸泡10 min，然后用纯净水冲洗干净后放置有湿纱布的培养皿中，放置在23℃，65%湿度恒温培养，定期观察，并及时补充纯净水，忌浇水太多。 1.2.7 数据统计与分析
记录种子萌发情况，以胚根（或胚芽）开始膨大突破种皮视为萌动，记录萌动时间，培养180 d统计种子萌发数，以胚根（或胚芽）长度≥5 mm视为萌发，种子萌发率（%）为萌发种子数占全部种子数的质量分数。采用SPSS 19.0对数据进行方差分析和多重比较S-N-K检验。
2 结果和分析
2.1 H2SO4对七叶一枝花种子发芽率的影响
从表1可知，50%（V/V）H2SO4对七叶一枝花平均发芽率影响显著。处理1的平均发芽率极最高为16.7%，极显著（p≤0.01）高于处理2、3、4、5。50%H2SO4缩短了种子萌动时间30 d，平均发芽率除了处理1比CK提高了3.4%，其他处理均比CK低；并且随着时间的增加，平均发芽率从16.7%逐渐较少到0。
2.2 NaOH对七叶一枝花种子发芽率的影响
从下表2可知，采用不同浓度NaOH和不同处理时间对七叶一枝花种子平均发芽率的影响达极显著。七叶一枝花种子萌动时间基本在100～110 d，比对照CK缩短了40～50 d；平均发芽率最高的处理1和处理2为23.3%，比对照CK增加10%，极显著高于其他处理和CK；最差的处理8为0；相同时间处理，10% NaOH比30% NaOH平均发芽率要高，而两种浓度NaOH随着浸泡时间的增加，七叶一枝花种子平均发芽率逐渐降低。
2.3 GA3对七叶一枝花种子发芽率的影响
从表3可知，GA3对七叶一枝花种子平均发芽率的影响显著。处理6平均发芽率最高为50.0%，比CK提高了36.7%，种子萌动时间为53 d，比CK减少了97 d；同时可以看到随着GA3浓度的增加，种子萌动时间逐渐减少，而平均发芽率随着浓度的增加，平均发芽率逐渐增加到处理6的50%后又逐渐减少。
2.4 2，4-D对七叶一枝花种子发芽率的影响
从下表4可知，2，4-D对七叶一枝花种子平均发芽率的影响显著。处理12平均发芽率最高为53.3%，比CK提高了40%，种子萌动时间为105 d，比CK减少了45 d；平均发芽率最低为16.7%，比CK仅多了3.4%，种子萌动时间比CK少了32 d；2，4-D的4种浓度均随这七叶一枝花浸泡时间的增加种子萌动时间增长，平均发芽率没有规律变化。
3 讨论
适当浓度的H2SO4处理七叶一枝花种子，种子发芽率提高不理想，并且随着处理时间加长，发芽率逐渐降低，主要原因是H2SO4破环了种皮，导致七叶一枝花种子被霉菌感染的几率增加而引发种子失活。所以在实际生产上不建议用化学或者物理方法破坏七叶一枝花的种皮，致使种子污染率增加。
NaOH影响七叶一枝花种子发芽率和萌动时间，采用10% NaOH处理种子10～15 min可以提高发芽率至23.3%，种子萌动时间缩短至100 d；增加NaOH的浓度和处理时间，会使种子发芽率降低，主要原因和H2SO4一样，种子种皮被破坏，增加了霉菌感染几率。所以在七叶一枝花实际生产上，适当pH的碱性土壤有利于提高种子发芽率。
GA3对七叶一枝花种子平均发芽率的影响比较明显，显著提高种子发芽率和缩短种子萌动时间，这与王艳芳等赤霉素處理可提高滇重楼种子发根率和发根速度的研究结果一致[14]， 苏海兰等[15]研究表明，随着发芽时间增长，GA3种子含量逐渐增加。其中处理6平均发芽率最高为50.0%，种子萌动时间为53 d；种子随GA3浓度的增加萌动时间逐渐较少，从92 d减少到53 d；种子平均发芽率随着GA3浓度和时间的增加显现先增加后减少的结果。说明在七叶一枝花种子发芽过程中GA3具有促进种子发芽的作用，而后期出现的平均发芽率减少是过高的GA3浓度抑制了种子的发芽。
2，4-D对七叶一枝花种子平均发芽率的影响比较显著，它能提高种子发芽率，不能显著较少种子萌动时间。采用20 mg/L浸泡72 h处理平均发芽率可达53.3%，而种子萌动时间为105 d，高于宋发军用2，4-D诱导滇重楼种子，种子萌发率为37.9%[16]；随着种子浸泡2，4-D时间的增加，增加了种子萌动时间；2，4-D浓度和时间的变化，平均发芽率呈不规律变化。
七叶一枝花种子发芽一个复杂的过程，外部的培养条件改变、内源激素的变化、内源酶的变化等条件都会影响种子的发芽，利用有效的因素缩短七叶一枝花种子发芽周期和提高发芽率，探索出一个最佳育苗方案是发展七叶一枝花产业的当务之急，所以，对七叶一枝花育苗还需要做大量科研工作。
参考文献
[1] 龚范武，罗先权，王 萍，等. 七叶一枝花种子育苗技术研究[J]. 湖南林业科技， 2014（01）： 50-53.
[2] 汤海峰，赵越平，蒋永培. 重楼属植物的研究概况[J]. 中草药， 1998（12）： 839-842.
[3] 张 珏，王跃华，杨 华，等. 华重楼研究现状[J]. 时珍国医国药， 2013（01）： 196-198.
[4] 李小莉，陈红琳，牟光敏. 七叶一枝花软膏抗炎镇痛作用研究[J]. 医药导报， 2007（02）： 139-140.
[5] 马传江，逯 双，曹广尚，等. 七叶一枝花繁育技术研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志， 2016（18）： 192-196.
[6] 王丽萍，起学伟. 云南重楼野生驯化及栽培技术研究初探[J]. 中国野生植物资源，2002（01）： 62-63.
[7] 王 岚，陈仕学，姚元勇. 梵净山七叶一枝花总黄酮含量测定[J]. 安徽农学通报，2013（20）： 25-28.
[8] 边洪荣，李小娜，王会敏. 重楼的研究及应用进展[J]. 中药材， 2002（03）： 218-220.
[9] 武珊珊，高文远，段宏泉，等. 重楼化学成分和药理作用研究进展[J]. 中草药，2004（03）： 110-113.
[10] 鹿洪秀，马德东. 七叶一枝花提取物抗肿瘤生长及转移的作用[J]. 山东医药，2013（45）： 33-34.
[11] 齐建红. 七叶一枝花的药学及临床应用研究进展[J]. 园艺与种苗， 2012（01）： 69-72.
[12] 王艳芳，李 戈，唐 玲，等. 滇重楼种子萌发过程观察及出苗影响因素研究[J]. 中药材， 2017（09）： 2 022-2 025.
[13] 陈 翠，杨丽云，吕丽芬，等. 云南重楼种子育苗技术研究[J]. 中国中药杂志，2007（19）： 1 979-1 983.
[14] 王艳芳，唐 玲，李荣英，等. 影响滇重楼种子萌发及胚根生长因素的研究[J]. 云南中医学院学报， 2012（2）： 28-31.
[15] 苏海兰，周先治，李 希，等. 七叶一枝花种子萌发不同阶段生理生化变化研究[J]. 中草药， 2017（22）： 4 755-4 763.
[16] 宋发军，罗 忠，黄 珍，等. 赤霉素处理对重楼种子萌发相关生理指标的影响[J]. 中南民族大学学报（自然科学版），2016（3）： 30-34.