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【摘 要】目的：观察和分析p53、血管内皮生长因子（VEGF）在鼻咽癌患者组织中的表达及临床意义。方法：收集40例鼻咽癌患者的组织蜡块，随机取同期鼻咽部慢性粘膜炎患者活检蜡块40例作对照。用免疫组化方法检测组织蜡块中p53、VEGF蛋白表达情况，并分析其临床意义。
【关键词】鼻咽癌；p53；血管内皮生长因子
【中图分类号】R737.14 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）06-3428-01
【Abstract】Objective：To investigate the expressions and significance of p53 and vascular endothelial growth factor（VEGF） in tissue of nasopharyngeal carcinoma（ NPC）. Methods ：Forceps biopsies of 40 cases with NPC and 40 cases with chronicity blennymenitis of pars nasalis pharynges measured the expressions of p53 and VEGF by immunohis-tochemical staining analysis.Results：The expressions of p53 and VEGF in NPC were significantly higher than those in chronicity blennymenitis of pars nasalis pharynges （P<0.05）. Conclusion：p53 and VEGF may play an important role in the process of nasopharyngeal carcinoma.
【Key words】Nasopharyngeal carcinoma； p53； Vascular Endothelial Growth Factor
鼻咽癌（ Nasopharyngeal Carcinoma，NPC）是我国南方常见恶性肿瘤，研究表明， 鼻咽癌的癌变过程中存在大量差异表达基因，而p53 是重要的抑瘤基因，当 p53 基因缺失或发生异常，可使细胞遗传特性发生改变： 出现染色体畸变；血管内皮生长因子（VEGF）在鼻咽癌的发生发展中可能起重要的作用，是特异的血管内皮刺激因子。本研究对40例鼻咽癌患者癌组织中p53和VEGF蛋白表达水平进行检测并分析其临床意义。
1 对象与方法
1.1 研究对象
选择我院 2013年1月～2013年12月的鼻咽癌患者病例40例，其中男性30 例，同时随机选取同期送检的慢性鼻咽炎对照组40例。年龄31～75岁，平均年龄52.76±12.32岁。所有组织均常规经10%中性福尔马林液固定、石蜡包埋。本组40例鼻咽癌有35例伴颈淋巴结转移，40例鼻咽癌组织学类型均为非角化型未分化癌。
1.2 主要试剂
Envision试剂（Dako），P53单克隆抗体（Santa Cruz），PBS和TBS缓冲液（国药集团），VEGF免疫组化试剂盒（即用型Max Vision TM，福建迈新公司），DBA（Sigma），BCIP/NBT（amreMCo）， RMPI-1640（GIBCO）。
1.3 免疫组化检测p53和VEGF的表达，采用免疫组织化学法染色，将上述标本4μm连续切片，按检测试剂盒说明书的检测步骤进行操作。结果判断： p53免疫组化染色及VEGF免疫组化染色均以细胞核内出现棕黄色染色为阳性，。采用JVC TK-C1481BEC彩色摄像机、OLYMPUS BH2型生物显微镜、MIQAS医学图像定量分析系统及医学图像定量分析软件进行分析。每张切片随机选取4个不重复视野，将呈现为棕黄色者视作阳性目标，用图像分析软件测定面积，取平均值作为最终结果。
1.4 统计学方法
采用 SPSS13.0 统计软件分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
3 讨论
肿瘤的发生发展的生物学过程极其复杂。p53蛋白基因突变是各类恶性肿瘤中最常见的基因变化之一，钟碧玲等[1]研究了 43 例鼻咽癌标本，发现 p53 基因的过表达与鼻咽癌中癌细胞增殖活性呈正相关，且证实了突变型 p53有促进细胞增殖作用。现研究认为，p53 在鼻咽癌细中的高表达提示p53 基因突变型或野生型 p53 功能改变可促使鼻咽癌的发生。大量实验表明血管生成是恶性肿瘤生长和转移的关键因素，肿瘤的持续生长必须依赖新生血管的形成[2-3]，其中VEGF为最为重要，在血管生成过程中，可增加血管通透性，促进血管内皮细胞增殖，促使新生血管形成，其生物活性与实体瘤的生长关系亦十分密切，现已发现多种恶性肿瘤中VEGF高表达，并认为其与肿瘤的生长和血管形成有密切关系[4]。研究表明VEGF在多种恶性肿瘤有较高水平的表达，如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌等，并与肿瘤的预后有关，VEGF与头颈部肿瘤也具有十分密切的关系[5]，而有关鼻咽癌中VEGF的表达报道较少，奚小彦等[6]研究VEGF的高表达与鼻咽癌的发生、发展密切相关。
本研究表明鼻咽癌患者组织标本中p53和VEGF水平明显增高，进一步表明两者在鼻咽癌的发生、发展中可能起一定的作用。且p53和VEGF的表达呈正相关，提示在鼻咽癌患者中p53可能通过上调VEGF的表达，调节肿瘤血管的生成。因此，p53和VEGF的检测有助于对鼻咽癌患者的监测和随访，对鼻咽癌治疗效果的判断及复发的监测可能有一定的临床意义和参考价值，且方法简便可行，易于开展。
参考文献
[1] 钟碧玲，宋永生.鼻咽癌中p53蛋白的积聚对瘤细胞有丝分裂和凋亡的影响[J].癌症，2000，19（5）： 432.
[2] Beround C，Soussi T.p53gene mutation ： software anddatabase [J].Nucleic Acids Res，1998，2（1）：200-204.
[3] Fujita Y， Abe R， Shimizu H. Clinical approaches toward tumor angiogenes： past， present and future[J]. Curr Pharm Des， 2008，14（36）：3820-3834.
[4] Fish JE， Santoro MM， Morton SU， et al. miR-126 regulates angiogenic signaling and vascular integrity[J]. Dev Cell， 2008，15（2）： 272-284.
[5]Joo YH，Jung CK， Kim MS， et al. Relationship between vascular endothelial growth factor and Notchl expression and lymphatic metastasis in tongue Cancer[J]. Otolaryngol Head Neck surg，2009，140（4）： 512-518.
[6]奚少彥，吴秋良，宗永生，等. 环氧化酶-2，表皮生长因子受体与Ki-667在鼻咽癌中表达的临床病理意义[J]，广东医学，2012，33（10）：1422-1425.
【关键词】鼻咽癌；p53；血管内皮生长因子
【中图分类号】R737.14 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）06-3428-01
【Abstract】Objective：To investigate the expressions and significance of p53 and vascular endothelial growth factor（VEGF） in tissue of nasopharyngeal carcinoma（ NPC）. Methods ：Forceps biopsies of 40 cases with NPC and 40 cases with chronicity blennymenitis of pars nasalis pharynges measured the expressions of p53 and VEGF by immunohis-tochemical staining analysis.Results：The expressions of p53 and VEGF in NPC were significantly higher than those in chronicity blennymenitis of pars nasalis pharynges （P<0.05）. Conclusion：p53 and VEGF may play an important role in the process of nasopharyngeal carcinoma.
【Key words】Nasopharyngeal carcinoma； p53； Vascular Endothelial Growth Factor
鼻咽癌（ Nasopharyngeal Carcinoma，NPC）是我国南方常见恶性肿瘤，研究表明， 鼻咽癌的癌变过程中存在大量差异表达基因，而p53 是重要的抑瘤基因，当 p53 基因缺失或发生异常，可使细胞遗传特性发生改变： 出现染色体畸变；血管内皮生长因子（VEGF）在鼻咽癌的发生发展中可能起重要的作用，是特异的血管内皮刺激因子。本研究对40例鼻咽癌患者癌组织中p53和VEGF蛋白表达水平进行检测并分析其临床意义。
1 对象与方法
1.1 研究对象
选择我院 2013年1月～2013年12月的鼻咽癌患者病例40例，其中男性30 例，同时随机选取同期送检的慢性鼻咽炎对照组40例。年龄31～75岁，平均年龄52.76±12.32岁。所有组织均常规经10%中性福尔马林液固定、石蜡包埋。本组40例鼻咽癌有35例伴颈淋巴结转移，40例鼻咽癌组织学类型均为非角化型未分化癌。
1.2 主要试剂
Envision试剂（Dako），P53单克隆抗体（Santa Cruz），PBS和TBS缓冲液（国药集团），VEGF免疫组化试剂盒（即用型Max Vision TM，福建迈新公司），DBA（Sigma），BCIP/NBT（amreMCo）， RMPI-1640（GIBCO）。
1.3 免疫组化检测p53和VEGF的表达，采用免疫组织化学法染色，将上述标本4μm连续切片，按检测试剂盒说明书的检测步骤进行操作。结果判断： p53免疫组化染色及VEGF免疫组化染色均以细胞核内出现棕黄色染色为阳性，。采用JVC TK-C1481BEC彩色摄像机、OLYMPUS BH2型生物显微镜、MIQAS医学图像定量分析系统及医学图像定量分析软件进行分析。每张切片随机选取4个不重复视野，将呈现为棕黄色者视作阳性目标，用图像分析软件测定面积，取平均值作为最终结果。
1.4 统计学方法
采用 SPSS13.0 统计软件分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
3 讨论
肿瘤的发生发展的生物学过程极其复杂。p53蛋白基因突变是各类恶性肿瘤中最常见的基因变化之一，钟碧玲等[1]研究了 43 例鼻咽癌标本，发现 p53 基因的过表达与鼻咽癌中癌细胞增殖活性呈正相关，且证实了突变型 p53有促进细胞增殖作用。现研究认为，p53 在鼻咽癌细中的高表达提示p53 基因突变型或野生型 p53 功能改变可促使鼻咽癌的发生。大量实验表明血管生成是恶性肿瘤生长和转移的关键因素，肿瘤的持续生长必须依赖新生血管的形成[2-3]，其中VEGF为最为重要，在血管生成过程中，可增加血管通透性，促进血管内皮细胞增殖，促使新生血管形成，其生物活性与实体瘤的生长关系亦十分密切，现已发现多种恶性肿瘤中VEGF高表达，并认为其与肿瘤的生长和血管形成有密切关系[4]。研究表明VEGF在多种恶性肿瘤有较高水平的表达，如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌等，并与肿瘤的预后有关，VEGF与头颈部肿瘤也具有十分密切的关系[5]，而有关鼻咽癌中VEGF的表达报道较少，奚小彦等[6]研究VEGF的高表达与鼻咽癌的发生、发展密切相关。
本研究表明鼻咽癌患者组织标本中p53和VEGF水平明显增高，进一步表明两者在鼻咽癌的发生、发展中可能起一定的作用。且p53和VEGF的表达呈正相关，提示在鼻咽癌患者中p53可能通过上调VEGF的表达，调节肿瘤血管的生成。因此，p53和VEGF的检测有助于对鼻咽癌患者的监测和随访，对鼻咽癌治疗效果的判断及复发的监测可能有一定的临床意义和参考价值，且方法简便可行，易于开展。
参考文献
[1] 钟碧玲，宋永生.鼻咽癌中p53蛋白的积聚对瘤细胞有丝分裂和凋亡的影响[J].癌症，2000，19（5）： 432.
[2] Beround C，Soussi T.p53gene mutation ： software anddatabase [J].Nucleic Acids Res，1998，2（1）：200-204.
[3] Fujita Y， Abe R， Shimizu H. Clinical approaches toward tumor angiogenes： past， present and future[J]. Curr Pharm Des， 2008，14（36）：3820-3834.
[4] Fish JE， Santoro MM， Morton SU， et al. miR-126 regulates angiogenic signaling and vascular integrity[J]. Dev Cell， 2008，15（2）： 272-284.
[5]Joo YH，Jung CK， Kim MS， et al. Relationship between vascular endothelial growth factor and Notchl expression and lymphatic metastasis in tongue Cancer[J]. Otolaryngol Head Neck surg，2009，140（4）： 512-518.
[6]奚少彥，吴秋良，宗永生，等. 环氧化酶-2，表皮生长因子受体与Ki-667在鼻咽癌中表达的临床病理意义[J]，广东医学，2012，33（10）：1422-1425.