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通过酵母双杂交技术筛选与DNA依赖蛋白激酶的催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic subunit，DNA-PKcs)磷酸化簇区域相互作用的蛋白并进行验证。
方法通过酵母双杂交技术，以之前构建的pGBKT7-DPC载体为诱饵，在人肝组织酵母文库中筛选与DNA-PKcs磷酸化簇区域相互作用的蛋白，对筛选出来的阳性酵母细胞克隆进行PCR鉴定、回转验证以及测序分析；构建诱饵蛋白和阳性克隆蛋白的真核表达载体，分别转染至人胚肾293T细胞中，检测诱饵蛋白和阳性克隆蛋白能否正确表达；最后将阳性克隆蛋白与诱饵蛋白共转染至293T细胞中，通过免疫共沉淀实验检测阳性克隆蛋白与诱饵蛋白之间的相互作用。
结果经过两轮酵母双杂交实验筛选得到12个文库质粒克隆，通过PCR鉴定确定7个插入片段长度互不相同的文库克隆，对7个文库克隆进行回转验证得到3个与DNA-PKcs磷酸化簇区域相互作用的蛋白，经测序分析显示分别为MBNL1、SIK2和YY1AP1。成功构建诱饵蛋白和3个阳性克隆蛋白的真核表达载体，且均能够在293T细胞中正确表达。免疫共沉淀实验证实筛选出来的3个阳性克隆蛋白均能够与DNA-PKcs磷酸化簇区域发生相互作用。
结论成功筛选到与DNA-PKcs磷酸化簇区域相互作用的蛋白并进行了验证。