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目的
观察高糖诱导足细胞Wnt/β-catenin通路活化及足细胞形态改变,探讨熊果酸保护足细胞损伤的可能机制。
方法体外培养足细胞并分为4组:正常糖组(葡萄糖5.5 mmol/L)、甘露醇组(葡萄糖5.5 mmol/L+甘露醇19.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖25 mmol/L)和熊果酸组(葡萄糖25 mmol/L+熊果酸5 μmol/L)。倒置相差显微镜检测足细胞形态转化;免疫荧光检测足细胞紧密连结蛋白1(ZO-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western印迹法检测足细胞β连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的表达;实时定量PCR法检测足细胞Wnt1、Wnt3a、Wnt5a、Wnt5b和β-catenin mRNA的表达。
结果正常糖组足细胞呈不规则的树枝状,高糖培养下足细胞向鹅卵石、细长状态的间充质细胞形态转化。高糖诱导足细胞后ZO-1蛋白表达下调,α-SMA表达增加,Wnt5a mRNA表达下调,β-catenin mRNA及蛋白表达上调,GSK3β蛋白表达下调(均P<0.05)。相对于高糖组,熊果酸组足细胞发生上皮细胞间充质转化的比例减少,ZO-1蛋白表达增加,α-SMA蛋白表达下降,Wnt5a mRNA表达上调,β-catenin mRNA及蛋白表达下调,GSK3β蛋白表达上调(均P<0.05)。
结论熊果酸通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制高糖诱导的足细胞上皮间充质转分化,减轻足细胞损伤。