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摘要：为了了解我县直接食用食品中食源性致病菌和肠道病毒污染状况，为三门县食源性疾病预防控制提供科学依据。按照国标方法进行检测，结论得出三门县直接食用食品食源性致病菌污染比较严重，存在着引起食源性疾病的较高风险，应加强对饭店、农贸市场直接食用食品的卫生监管，同时要加大对餐饮业从业人员的卫生知识培训。
关键字：直接食用食品食源性致病菌肠道病毒主动监测
我中心于2011年4月-2012年3月在三门县城关饭店、农贸市场中开展直接食用食品食源性致病菌和肠道病毒的监测工作。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 样品来源
2011年4月至2012年3月，每月在三门县城关农贸市场和饭店中，以无菌操作方式按比例随机采集7种直接食用食品样品20份，仝年共240份。其中生/半生食海产品72份，占30%；腌制品48份，占20%；即食非发酵性豆制品、凉拌菜、熟肉制品、生食蔬菜、果汁均各采24份，各占10%。
1.2 试剂和仪器
BPW、Sc、TTB、营养肉汤、GN、3%NaCL碱性蛋白胨水、7.5%NaCL肉汤、TCBS琼脂、
MAc琼脂、SS琼脂、碱性蛋白胨水、4号平板、EMB琼脂、PALCAM琼脂、三糖铁（TSI）琼脂等由青岛高科园海博生物技术有限公司供货。
李斯特菌增菌肉汤、Baird-Parker琼脂基础、生化微量管等由杭州天和微生物试剂有限公司提供。
各菌属诊断血清由宁波天润生物药业有限公司提供。
VTTEK2全自动微生物鉴定仪及李斯特菌属鉴定试剂盒，均由法国梅里埃公司生产，梅里埃诊断产品（上海）有限公司供货。
AP120E生化鉴定试剂盒系法国梅里埃公司生产由杭州怡丹生物技术有限公司提供。以上所用的每批培养基、生化微量管、诊断血清及试剂均经国家标准菌株或已知阳性菌株验证，并均在有效期内使用。
1.3 检测项目
金黄色葡萄球菌、沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、致泻性大肠埃希菌（包括产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）。肠道侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、肠道出血性大肠埃希氏菌（EHEC）O157：H7）、单核细胞增多李斯特菌、诺瓦克病毒核酸、轮状病毒核酸。
1.4 标准对照菌株
鼠伤寒沙门菌ATCC50013、志贺菌2aATCC12022、大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923，由中国生物检定所提供。
1.5 阳性对照菌株
单核细胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌、非01群霍乱弧菌由台州市疾病预防控制中心提供。
1.6 检测方法
沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增多李斯特菌，依据GB4789.4.1.0.302010！
志贺菌依据GB/T4789.5-2010：致泻大肠埃希氏菌GB/T4789.6-2003；副溶血性弧菌GB/T4789.7-2008。
副溶血性弧菌定量检测：无菌称取海产品或腌制品25g+225mL3%NaCl碱性蛋白胨水，制成1：10悬液，吸取此液3份10mL分别接种到10mL双料3%NaCl碱性蛋白胨水管中，另吸取3份1mL和3份0.1mL，分别接种到10mL单料3%NaCl碱性蛋白胨水管中，36℃18h，分离到TCBS琼脂，挑取可疑菌落，按GB/T4789.72008进行生化鉴定，再经AP120E生化鉴定试剂盒核实。
霍乱弧菌检验：25g样品+225mL碱性蛋白胨水，36℃6h～8h，吸该培养物0.2mL加到10mL碱性蛋白胨水，36℃下6h～8h，进行第二次增菌，然后分离到四号平板，36℃下18h-24h，分纯初步鉴定，最后确定鉴定，结果报告。
肠道病毒样品收集及检验：吸取样品液体部分约5mL，如果样品无液体的则加无菌生理盐水少许，混匀后再从中吸取约5mL，放入无菌螺口试管，编号后放置在-70℃保存。检测时样品待融化后，再按WS271-2007《感染性腹泻诊断标准》操作。
2 结果
7种样品中致病菌污染率最高的是生食蔬菜25.9%（6/24）。具体见表1。
饭店食源性致病菌污染率为10.8%（13/120）高于农贸市场9.2%（11/120）。饭店中金葡菌污染率最高，农贸市场中单增菌次之，具体见表2。
此次检测直接食用食品食源性致病菌平均检出率为10%，其中金葡菌检出率最高。此次检测直接食用食品食源性致病菌平均检出率为10%，具体见表3。
3 讨论
一年来，我们通过对7种240份直接食用食品样品的主动监测，共检出4种24株中食源性致病菌，总检出率为10%（24/240），高于吉林省长春市1.43%将近7倍，污染比较严重。生食蔬菜、熟肉制品、凉拌菜致病菌检出率分别是25.9%、20.5%和16.7%，主要致病菌是金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌，与台州市8类食品5种食源性主要致病菌污染相似：生/半生食海产品致病菌污染率为8.3%，腌制品和即食非发酵性豆制品均为4.2%，金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌和肠致病性大肠埃希菌均有检出。我县位于浙江省东北部，属于亚热带地区，气候偏暧，适合各种细菌生长繁殖，蟑螂、蚊蝇、鼠类等活动比较活跃，直接食用食品在清洗、加工、贮存、销售过程中容易遭受各种细菌、肠道病毒等的二次污染，提示我县存在着引起食源性疾病的风险较高。检出的4种阳性菌株均可以引起食物中毒，尤其是副溶血性弧菌。副溶血性弧菌引起的食物中毒在我国微生物性食物中毒中位居第二，在东南沿海省份则位居首位。表3显示，副溶性弧菌污染率是1.7%（2/1 20），而生/半生食海产品和腌制品中副溶性弧菌污染率则分别是1.4%（1/72）、2.1%（1/48），明显高于上海市崇明县农贸市场腌腊制品副溶血性弧菌检出率1.75%（1/57）。
通过此次对这两种肠道病毒核酸的主动监测，主要是想了解我县有无肠道病毒的污染，此次结果表明未检出这两种病毒，说明我县目前尚未受到肠道病毒的污染。
关键字：直接食用食品食源性致病菌肠道病毒主动监测
我中心于2011年4月-2012年3月在三门县城关饭店、农贸市场中开展直接食用食品食源性致病菌和肠道病毒的监测工作。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 样品来源
2011年4月至2012年3月，每月在三门县城关农贸市场和饭店中，以无菌操作方式按比例随机采集7种直接食用食品样品20份，仝年共240份。其中生/半生食海产品72份，占30%；腌制品48份，占20%；即食非发酵性豆制品、凉拌菜、熟肉制品、生食蔬菜、果汁均各采24份，各占10%。
1.2 试剂和仪器
BPW、Sc、TTB、营养肉汤、GN、3%NaCL碱性蛋白胨水、7.5%NaCL肉汤、TCBS琼脂、
MAc琼脂、SS琼脂、碱性蛋白胨水、4号平板、EMB琼脂、PALCAM琼脂、三糖铁（TSI）琼脂等由青岛高科园海博生物技术有限公司供货。
李斯特菌增菌肉汤、Baird-Parker琼脂基础、生化微量管等由杭州天和微生物试剂有限公司提供。
各菌属诊断血清由宁波天润生物药业有限公司提供。
VTTEK2全自动微生物鉴定仪及李斯特菌属鉴定试剂盒，均由法国梅里埃公司生产，梅里埃诊断产品（上海）有限公司供货。
AP120E生化鉴定试剂盒系法国梅里埃公司生产由杭州怡丹生物技术有限公司提供。以上所用的每批培养基、生化微量管、诊断血清及试剂均经国家标准菌株或已知阳性菌株验证，并均在有效期内使用。
1.3 检测项目
金黄色葡萄球菌、沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、致泻性大肠埃希菌（包括产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）。肠道侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、肠道出血性大肠埃希氏菌（EHEC）O157：H7）、单核细胞增多李斯特菌、诺瓦克病毒核酸、轮状病毒核酸。
1.4 标准对照菌株
鼠伤寒沙门菌ATCC50013、志贺菌2aATCC12022、大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923，由中国生物检定所提供。
1.5 阳性对照菌株
单核细胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌、非01群霍乱弧菌由台州市疾病预防控制中心提供。
1.6 检测方法
沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增多李斯特菌，依据GB4789.4.1.0.302010！
志贺菌依据GB/T4789.5-2010：致泻大肠埃希氏菌GB/T4789.6-2003；副溶血性弧菌GB/T4789.7-2008。
副溶血性弧菌定量检测：无菌称取海产品或腌制品25g+225mL3%NaCl碱性蛋白胨水，制成1：10悬液，吸取此液3份10mL分别接种到10mL双料3%NaCl碱性蛋白胨水管中，另吸取3份1mL和3份0.1mL，分别接种到10mL单料3%NaCl碱性蛋白胨水管中，36℃18h，分离到TCBS琼脂，挑取可疑菌落，按GB/T4789.72008进行生化鉴定，再经AP120E生化鉴定试剂盒核实。
霍乱弧菌检验：25g样品+225mL碱性蛋白胨水，36℃6h～8h，吸该培养物0.2mL加到10mL碱性蛋白胨水，36℃下6h～8h，进行第二次增菌，然后分离到四号平板，36℃下18h-24h，分纯初步鉴定，最后确定鉴定，结果报告。
肠道病毒样品收集及检验：吸取样品液体部分约5mL，如果样品无液体的则加无菌生理盐水少许，混匀后再从中吸取约5mL，放入无菌螺口试管，编号后放置在-70℃保存。检测时样品待融化后，再按WS271-2007《感染性腹泻诊断标准》操作。
2 结果
7种样品中致病菌污染率最高的是生食蔬菜25.9%（6/24）。具体见表1。
饭店食源性致病菌污染率为10.8%（13/120）高于农贸市场9.2%（11/120）。饭店中金葡菌污染率最高，农贸市场中单增菌次之，具体见表2。
此次检测直接食用食品食源性致病菌平均检出率为10%，其中金葡菌检出率最高。此次检测直接食用食品食源性致病菌平均检出率为10%，具体见表3。
3 讨论
一年来，我们通过对7种240份直接食用食品样品的主动监测，共检出4种24株中食源性致病菌，总检出率为10%（24/240），高于吉林省长春市1.43%将近7倍，污染比较严重。生食蔬菜、熟肉制品、凉拌菜致病菌检出率分别是25.9%、20.5%和16.7%，主要致病菌是金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌，与台州市8类食品5种食源性主要致病菌污染相似：生/半生食海产品致病菌污染率为8.3%，腌制品和即食非发酵性豆制品均为4.2%，金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌和肠致病性大肠埃希菌均有检出。我县位于浙江省东北部，属于亚热带地区，气候偏暧，适合各种细菌生长繁殖，蟑螂、蚊蝇、鼠类等活动比较活跃，直接食用食品在清洗、加工、贮存、销售过程中容易遭受各种细菌、肠道病毒等的二次污染，提示我县存在着引起食源性疾病的风险较高。检出的4种阳性菌株均可以引起食物中毒，尤其是副溶血性弧菌。副溶血性弧菌引起的食物中毒在我国微生物性食物中毒中位居第二，在东南沿海省份则位居首位。表3显示，副溶性弧菌污染率是1.7%（2/1 20），而生/半生食海产品和腌制品中副溶性弧菌污染率则分别是1.4%（1/72）、2.1%（1/48），明显高于上海市崇明县农贸市场腌腊制品副溶血性弧菌检出率1.75%（1/57）。
通过此次对这两种肠道病毒核酸的主动监测，主要是想了解我县有无肠道病毒的污染，此次结果表明未检出这两种病毒，说明我县目前尚未受到肠道病毒的污染。