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摘 要：自然界的水中含有细菌、淡水藻类、原生动物、病毒等多种类型的微生物，其中有一些微生物可直接或间接导致人类患病。虽然市售瓶装矿泉水在装瓶前一般会对水源进行过滤灭菌处理，但是并不排除部分厂家因考虑成本的因素而未进行严格操作，因而目前市场上的瓶装矿泉水仍存在安全隐患。
关键词：瓶装;矿泉水;微生物;检测;防治
水是生命之源，人類的生产活动离不开水，水质安全是人类健康的第一要素。随着生活水平的不断提高，人们对饮用水的安全问题日益重视，而瓶装矿泉水饮用方便、易于携带，因此已成为人们日常生活中不可或缺的饮品。
1 细菌菌落总数的测定
1.1 平皿计数法
平皿计数法所用的培养基为营养琼脂培养基，将1mL的水样与冷却至45℃以下的未凝固的营养琼脂混匀于培养皿中，待凝固后翻转培养皿，放进36℃的恒温培养箱中培养48h后取出计数。营养琼脂的浇灌量需一致，菌落总数不在30～300CFU/mL范围的样品要重新制作（增加水样或稀释水样）。
1.2 涂布平板法
涂布平板法所用的培养基可以为营养琼脂培养基，也可以为牛肉膏蛋白胨培养基。将配制好且灭菌后的培养基趁热倒入无菌平板中，待凝固后再吸取0.1mL水样滴于培养皿上，用涂布棒涂均匀，平放在桌上静置20～30min，使菌液完全渗入，然后将平板倒转，于37℃下恒温培养48h计数。
2 大肠菌群数的测定
2.1 多管发酵法
多管发酵法是根据大肠菌群的发酵乳糖产酸产气的特征来检测水样中大肠菌群的方法。多管发酵法包括乳糖蛋白胨发酵法和乳糖胆盐发酵法[9]。乳糖蛋白胨发酵法所用的培养基有乳糖蛋白胨液体培养基和伊红美蓝平板培养基。取1mL水样接种于乳糖蛋白胨发酵管中，放置一杜氏小管，于36.5℃条件下培养24～48h。变黄且产气的再接种于伊红美蓝平板培养基上于36.5℃条件下培养24h，对可疑菌落进行革兰氏染色镜检，挑取符合特征的菌落用乳糖蛋白胨液体培养基进行确证试验。
2.2 滤膜法
滤膜法分为国标滤膜法和酶底物滤膜法[10]。滤膜法是0.45μm的滤膜经过抽滤一定量的水样（100～250mL），而使得细菌被截留在滤膜上，随后通过培养、计数和鉴定被截留菌的方法。
2.2.1国标滤膜法
国标滤膜法的培养基为品红亚硫酸钠培养基和乳糖蛋白胨液体培养基。将有细菌的一面贴在品红亚硫酸钠培养基上，于37℃条件下培养24h，挑取颜色为紫红色的菌落进行革兰氏染色，凡为革兰氏阴性的菌群都需接种于乳糖蛋白胨液体培养基进行复发酵试验，再于37℃条件下培养24h，放置一杜氏小管，若培养液变黄且产气则判定为大肠菌群阳性，结果以CFU/100mL表示。
2.2.2酶底物滤膜法
酶底物滤膜法的培养基为酶底物技术的选择性培养基。将有细菌的一面贴在酶底物培养基上，于37℃条件下培养24h，有蓝绿色的菌群即证明有大肠菌群，结果以CFU/100mL表示。
2.3 酶底物法
酶底物法的试剂是ONPG和MUG2种营养指示剂。大肠菌群细菌产生的β-半乳糖苷酶和大肠埃希氏菌产生的β-葡萄糖醛酸酶能分别分解2种指示剂，而使得营养液呈黄色，并且在波长366nm的紫外灯下产生荧光。可用51孔定量盘作为试验的主容器，计数结果以MPN/100mL表示。
3 铜绿假单胞菌的测定
铜绿假单胞菌原称为绿脓杆菌，是一种革兰氏阴性杆菌，是重要的水源和食源性致病菌。土壤、水、空气、皮肤表面、呼吸道和肠道中都有该菌存在。它是一种条件致病菌，免疫力低下的老人和婴幼儿易被感染，被烧伤烫伤的患者、有眼部疾病、血液病恶性肿瘤的患者，以及术后患者被感染后常使病情恶化，严重时可引起败血症。
4 病毒和原生动物的测定
病毒和微生物都是较为常见的病原微生物，其中，肠道病毒在自然水域中最为常见;肠炎病毒多见于被人畜粪便污染后的水源，对怀孕的妇女影响较大;轮状病毒会使免疫力不高的婴幼儿出现死亡的症状。常见的原生动物是贾第虫和隐孢子虫，前者会使人腹泻，严重时可致人死亡;后者是其他致病微生物的中间宿主，它的虫卵进入人体会带来潜在威胁。
提到检测病毒的方法比较多，但首先应用微孔过滤器对其进行收集，再开展洗脱、超滤、吸絮凝等过滤步骤。常规检测方法为直接电镜观察，免疫技术是一种较为精准的方法，还可以运用分子生物學的方法，但运用这种方法时要将培養物反转吸收起来，清除影响检测结果的干扰物。提到国外采用PCR技术来检测水样中的肠道病毒和甲肝病毒，其耗时与传统的细胞培养相较缩短了50%。
检测原生动物一般也用显微镜直接观察，但容易漏检，因此张敏等人[19]认为免疫荧光分子学检测法也是认可度比较高的方法，研究建立了肝吸虫虫卵DNA的提取和PCR检测方法，可快速检测到虫卵，具有特异性。
5 杀灭微生物防治微生物感染的方法与注意事项
5.1 造成微生物超标的主要原因
水源受到污染;生产车间设备条件差，没有严格严肃的态度;灭菌操作人员不注意个人卫生，携带微生物;回收的瓶、盖消毒不彻底;运输中因密封不严而导致空气中微生物进入等。
5.2 解决方法
对水源进行彻底消毒;相关部门加大惩罚力度和执行力，做好教育宣传;相关操作人员应具备专业水平，企业应当提供让他们不断学习的机会;瓶、盖彻底消毒，定期检查机器;有些微生物生长和瓶子的材料有关，应避免使用微生物喜欢聚集生长的材料;紫外线对一般细菌杀灭效果较好，对霉菌却无效，这时就可以采用液体超高温瞬间灭菌技术杀灭霉菌。
5.3 其他注意事项
在检验微生物时，应当注意：①检验人员操作规范;②实验室应当保持适宜的温度和湿度，防止微生物生长过快或过慢;③保证实验室的无菌机器没有损坏，可存在无菌环境。
6 结束语
近年来，瓶装水微生物指标不达标报道频发，我国水质环境面临着一个严峻的形势，相关部门应当加强监督管理、严格执法;同时矿泉水企业也应当遵守相关规定，做良心商家;消费者更应该擦亮眼睛，谨慎购买，瓶装水一旦开盖，尽快饮用，切勿长时间存放，否则将有饮用含有超标微生物饮用水的危险。
参考文献
[1]刘凤莲，吴惠忠，许秉忠，等.宁夏城市饮用水微生物指标与介水传染病的相关性[J].环境与卫生杂志，2014，31（9）：827-828.
[2]吴清平，张永清，张菊梅.饮用水微生物安全风险控制[J].食品研究与开发，2009，30（11）：188-191.
关键词：瓶装;矿泉水;微生物;检测;防治
水是生命之源，人類的生产活动离不开水，水质安全是人类健康的第一要素。随着生活水平的不断提高，人们对饮用水的安全问题日益重视，而瓶装矿泉水饮用方便、易于携带，因此已成为人们日常生活中不可或缺的饮品。
1 细菌菌落总数的测定
1.1 平皿计数法
平皿计数法所用的培养基为营养琼脂培养基，将1mL的水样与冷却至45℃以下的未凝固的营养琼脂混匀于培养皿中，待凝固后翻转培养皿，放进36℃的恒温培养箱中培养48h后取出计数。营养琼脂的浇灌量需一致，菌落总数不在30～300CFU/mL范围的样品要重新制作（增加水样或稀释水样）。
1.2 涂布平板法
涂布平板法所用的培养基可以为营养琼脂培养基，也可以为牛肉膏蛋白胨培养基。将配制好且灭菌后的培养基趁热倒入无菌平板中，待凝固后再吸取0.1mL水样滴于培养皿上，用涂布棒涂均匀，平放在桌上静置20～30min，使菌液完全渗入，然后将平板倒转，于37℃下恒温培养48h计数。
2 大肠菌群数的测定
2.1 多管发酵法
多管发酵法是根据大肠菌群的发酵乳糖产酸产气的特征来检测水样中大肠菌群的方法。多管发酵法包括乳糖蛋白胨发酵法和乳糖胆盐发酵法[9]。乳糖蛋白胨发酵法所用的培养基有乳糖蛋白胨液体培养基和伊红美蓝平板培养基。取1mL水样接种于乳糖蛋白胨发酵管中，放置一杜氏小管，于36.5℃条件下培养24～48h。变黄且产气的再接种于伊红美蓝平板培养基上于36.5℃条件下培养24h，对可疑菌落进行革兰氏染色镜检，挑取符合特征的菌落用乳糖蛋白胨液体培养基进行确证试验。
2.2 滤膜法
滤膜法分为国标滤膜法和酶底物滤膜法[10]。滤膜法是0.45μm的滤膜经过抽滤一定量的水样（100～250mL），而使得细菌被截留在滤膜上，随后通过培养、计数和鉴定被截留菌的方法。
2.2.1国标滤膜法
国标滤膜法的培养基为品红亚硫酸钠培养基和乳糖蛋白胨液体培养基。将有细菌的一面贴在品红亚硫酸钠培养基上，于37℃条件下培养24h，挑取颜色为紫红色的菌落进行革兰氏染色，凡为革兰氏阴性的菌群都需接种于乳糖蛋白胨液体培养基进行复发酵试验，再于37℃条件下培养24h，放置一杜氏小管，若培养液变黄且产气则判定为大肠菌群阳性，结果以CFU/100mL表示。
2.2.2酶底物滤膜法
酶底物滤膜法的培养基为酶底物技术的选择性培养基。将有细菌的一面贴在酶底物培养基上，于37℃条件下培养24h，有蓝绿色的菌群即证明有大肠菌群，结果以CFU/100mL表示。
2.3 酶底物法
酶底物法的试剂是ONPG和MUG2种营养指示剂。大肠菌群细菌产生的β-半乳糖苷酶和大肠埃希氏菌产生的β-葡萄糖醛酸酶能分别分解2种指示剂，而使得营养液呈黄色，并且在波长366nm的紫外灯下产生荧光。可用51孔定量盘作为试验的主容器，计数结果以MPN/100mL表示。
3 铜绿假单胞菌的测定
铜绿假单胞菌原称为绿脓杆菌，是一种革兰氏阴性杆菌，是重要的水源和食源性致病菌。土壤、水、空气、皮肤表面、呼吸道和肠道中都有该菌存在。它是一种条件致病菌，免疫力低下的老人和婴幼儿易被感染，被烧伤烫伤的患者、有眼部疾病、血液病恶性肿瘤的患者，以及术后患者被感染后常使病情恶化，严重时可引起败血症。
4 病毒和原生动物的测定
病毒和微生物都是较为常见的病原微生物，其中，肠道病毒在自然水域中最为常见;肠炎病毒多见于被人畜粪便污染后的水源，对怀孕的妇女影响较大;轮状病毒会使免疫力不高的婴幼儿出现死亡的症状。常见的原生动物是贾第虫和隐孢子虫，前者会使人腹泻，严重时可致人死亡;后者是其他致病微生物的中间宿主，它的虫卵进入人体会带来潜在威胁。
提到检测病毒的方法比较多，但首先应用微孔过滤器对其进行收集，再开展洗脱、超滤、吸絮凝等过滤步骤。常规检测方法为直接电镜观察，免疫技术是一种较为精准的方法，还可以运用分子生物學的方法，但运用这种方法时要将培養物反转吸收起来，清除影响检测结果的干扰物。提到国外采用PCR技术来检测水样中的肠道病毒和甲肝病毒，其耗时与传统的细胞培养相较缩短了50%。
检测原生动物一般也用显微镜直接观察，但容易漏检，因此张敏等人[19]认为免疫荧光分子学检测法也是认可度比较高的方法，研究建立了肝吸虫虫卵DNA的提取和PCR检测方法，可快速检测到虫卵，具有特异性。
5 杀灭微生物防治微生物感染的方法与注意事项
5.1 造成微生物超标的主要原因
水源受到污染;生产车间设备条件差，没有严格严肃的态度;灭菌操作人员不注意个人卫生，携带微生物;回收的瓶、盖消毒不彻底;运输中因密封不严而导致空气中微生物进入等。
5.2 解决方法
对水源进行彻底消毒;相关部门加大惩罚力度和执行力，做好教育宣传;相关操作人员应具备专业水平，企业应当提供让他们不断学习的机会;瓶、盖彻底消毒，定期检查机器;有些微生物生长和瓶子的材料有关，应避免使用微生物喜欢聚集生长的材料;紫外线对一般细菌杀灭效果较好，对霉菌却无效，这时就可以采用液体超高温瞬间灭菌技术杀灭霉菌。
5.3 其他注意事项
在检验微生物时，应当注意：①检验人员操作规范;②实验室应当保持适宜的温度和湿度，防止微生物生长过快或过慢;③保证实验室的无菌机器没有损坏，可存在无菌环境。
6 结束语
近年来，瓶装水微生物指标不达标报道频发，我国水质环境面临着一个严峻的形势，相关部门应当加强监督管理、严格执法;同时矿泉水企业也应当遵守相关规定，做良心商家;消费者更应该擦亮眼睛，谨慎购买，瓶装水一旦开盖，尽快饮用，切勿长时间存放，否则将有饮用含有超标微生物饮用水的危险。
参考文献
[1]刘凤莲，吴惠忠，许秉忠，等.宁夏城市饮用水微生物指标与介水传染病的相关性[J].环境与卫生杂志，2014，31（9）：827-828.
[2]吴清平，张永清，张菊梅.饮用水微生物安全风险控制[J].食品研究与开发，2009，30（11）：188-191.