【摘 要】
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为了建立一种可以同时鉴定大肠杆菌O8、O9、O149与O157血清型的快速高效多重PCR检测方法，本研究根据GenBank中大肠杆菌O8、O9、O149、O157血清型的O抗原合成基因簇特异性靶标基因序列，设计合成4对PCR引物，优化引物浓度及反应条件，建立多重PCR检测方法。然后，分析多重PCR方法的特异性、敏感性，并利用建立的多重PCR方法检测大肠杆菌临床分离株验证该方法的可靠性。特异性结果显
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31972654，32172856）； 国家重点研发计划项目（2018YFE0102200）； 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目（2021JB07）； 上海市浦江人才计划项目（2019PJD057）；
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为了建立一种可以同时鉴定大肠杆菌O8、O9、O149与O157血清型的快速高效多重PCR检测方法，本研究根据GenBank中大肠杆菌O8、O9、O149、O157血清型的O抗原合成基因簇特异性靶标基因序列，设计合成4对PCR引物，优化引物浓度及反应条件，建立多重PCR检测方法。然后，分析多重PCR方法的特异性、敏感性，并利用建立的多重PCR方法检测大肠杆菌临床分离株验证该方法的可靠性。特异性结果显示，多重PCR方法可有效鉴定大肠杆菌O8、O9、O149、O157血清型，而检测其他血清型大肠杆菌及菌种时无扩增条带，表明多重PCR方法具有较好的特异性。敏感性结果显示，多重PCR方法检测大肠杆菌O8、O9、O149、O157血清型的菌液和DNA的最低检测限分别为105 CFU、105 CFU、103 CFU、103 CFU和1 ng、100 pg、10 pg、10 pg。临床分离株检测显示，与传统血清凝集试验相比，多重PCR方法更准确、可靠。本研究成功建立了一种可特异、灵敏、快速鉴定大肠杆菌O8、O9、O149与O157血清型的多重PCR方法，为大肠杆菌O8、O9、O149与O157血清型检测和流行病学调查提供了新的技术手段。
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