【摘 要】
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从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDV HK1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3PCR片段和5PCR片段),分别克隆进pGEM
【机 构】
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中国农业科学院,兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046;西北农林科技大学,动物科学院,陕西,杨凌,712100;
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从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDV HK1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3PCR片段和5PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体.利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定.结果表明,HK1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾.在HK1/70株全长cDNA序列的5端引入了T7启动子序列,在poly A 3端引入了Psp1406Ⅰ识别序列.通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系最近,且位于CB5遗传进化树的分支上.HK1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础.
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