【摘 要】
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为制备新城疫病毒(NDV)中强毒株核酸检测阳性标准参考样品,本研究以NDV中强毒株RNA为模板,设计NDV融合蛋白F基因特异性引物,通过RT-PCR扩增全长F基因,克隆于pGEM-T载体中,采
【机 构】
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山东出入境检验检疫局,山东青岛,266002潍坊市畜牧兽医局,山东潍坊,261041;济南出入境检验检疫局,山东济南,250014;
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为制备新城疫病毒(NDV)中强毒株核酸检测阳性标准参考样品,本研究以NDV中强毒株RNA为模板,设计NDV融合蛋白F基因特异性引物,通过RT-PCR扩增全长F基因,克隆于pGEM-T载体中,采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托其他实验室采用外标定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定性试验表明室温20℃～25℃14d,2℃～8℃3个月以及-20℃保存一年RNA的含量均无明显变化.核酸标准样品定值为(1.632±0.029)×107拷贝,可以用作NDV中强毒株核酸检测的标准质控品.
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