观察二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、胶原合成的影响。
方法使用不同浓度DMOG分别作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测其增殖水平的差异和药物半数抑制浓度(IC50)及最佳干预时间;并将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为对照组、DMOG组(IC50为800 μmol/L的DMOG)、缺氧组及缺氧+DMOG组(缺氧+800 μmol/L的DMOG),作用36 h(最佳干预时间)后用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot检测各组的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞的增殖水平,流式细胞仪检测各组的细胞周期;羟脯氨酸比色法检测各组细胞的胶原合成。
结果随着浓度的增加(200、400、800、1 600 μmol/L),DMOG对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖抑制呈剂量时间依耐性;在瘢痕疙瘩成纤维细胞中,缺氧组、DMOG组和缺氧+DMOG组的HIF-1α的蛋白(0.98±0.09、1.36±0.16、1.43±0.21)和mRNA(1.14±0.11、1.24±0.16、1.27±0.11)的表达均较对照组的蛋白(0.71±0.13)和mRNA(1.01±0.02)高(P<0.01)。流式细胞结果显示缺氧组、DMOG组和缺氧+DMOG组的G0/G1期细胞比例[(56.7±2.2)%、(61.3±3.3)%、(73.4±2.5)%],较对照组[(48.8±2.4)%]明显增加(P<0.01),S期细胞和G2/M期细胞比例均减少(P<0.01)。与对照组比较,其他3组细胞增殖均受到了抑制,并且其中DMOG组和缺氧+DMOG组培养36 h后细胞吸光度较对照组明显降低(0.54±0.01、0.29±0.02比1.01±0.02,P<0.01);与对照组比较,缺氧组中的羟脯氨酸水平、Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白有均所升高(P<0.01)。与对照组比较,DMOG组和缺氧+DMOG组中的羟脯氨酸(11.86±0.64、14.72±0.03比15.92±0.22)、Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA(0.63±0.07、0.86±0.08、0.56±0.09、0.82±0.10比1.00±0.01、1.00±0.03)和蛋白(0.78±0.19、1.06±0.18、0.66±0.13、0.81±0.10比2.23±0.14、1.53±0.05)表达均明显降低(P<0.01)。
结论DMOG对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖具抑制作用,并能显著抑制其胶原的合成。