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【中圖分类号】R722.1【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2014）10
【摘要】目的：通过建立哮喘豚鼠模型，检测哮喘豚鼠肺组织中NF-κBp65表达水平，探讨NF-κBp65在哮喘发病中的变化及不同剂量多索茶碱对其的影响。方法：将40只健康雄性豚鼠随机分成正常对照组（A组），哮喘模型组（B组），多索茶碱低剂量治疗组（C组），多索茶碱中剂量治疗组（D组），多索茶碱高剂量治疗组（E组）。B、C、D、E经鸡卵白蛋白（OVA）致敏后，给予OVA雾化吸入，诱发哮喘发作制作哮喘模型，多索茶碱低剂量组给予多索茶碱50mg.kg-1 .d-1，多索茶碱中剂量组及多索茶碱高剂量组分别给予多索茶碱100mg.kg-1 .d-1和200mg.kg-1 .d-1灌服。在末次雾化吸入OVA后，经动物呼吸机测定豚鼠呼吸道压力。用支气管肺泡灌洗液（BALF） 和肺组织病理分析的方法检测肺组织炎症；用免疫组织化学的方法检测NF-κB亚单位P65在细胞核内的表达。结果：肺组织病理切片显示C、D、E组肺组织炎症细胞浸润的范围较B组明显减小。C组 BALF中白细胞总数为 （30.4±3.2）X108/L ， D组 BALF中白细胞总数为（10.9±3.8）X108/L，E组 BALF中白细胞总数为（8.5±2.3）X108/L；B组为（70.5±8.4 ）X108/L，（ P<0.05）。C组主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达NF - κB阳性的细胞数为（2.5±0.5）X103个/mm ，D组为（1.1±0.1）X103个/mm， E组为（0.9±0.08）X103个/mm ，B组为（4.3±0.5）X103个/mm （ P< 0.05）。结论： 核因子N F - κB的激活在哮喘发病过程中具有重要作用。多索茶碱干预组BALF中自细胞总数较模型组降低，主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达 N F-κB阳性的细胞数明显减少，证明多索茶碱可明显减轻哮喘引起的气道炎症。多索茶碱能够抑制哮喘豚鼠核因子N F - κB的表达 ，这可能是治疗哮喘的机制之一。
【关键词】多索茶碱； NF-κB ； 哮喘； 豚鼠
The Effect of Doxofyliine on Expression of Nuclear Factor-kappa Bp65（NF-κBp65） in Asthmatic Guineapig
Zheng wei-hua， Peng juan， Zhou yong，Wang xin，Zhang hong
Department of Pediatrics ， The Affiliated Hospitol of Guilin Medical College，Guilin 541001，China
【Abstract】Objective：To investigate the expression of nuclear factor in the lung tissue of asthmatic guineapig and the effect of doxofyliine with different dose on NF-κBp65 expression，as well as to analyze its role in asthma Pathogenesis. Methods： Forty Guineapig were randomly divided into five groups. Group A （normal control group ，n = 8）， group B （ asthmatic model group， n = 8） ， group C （low dose doxofyliine treated group ， n = 8）， group D （moderate dose doxofyliine treated group， n = 8）， group E （high dose doxofyliine treated group， n = 8）. After ovalbumin irritated ， ovalbumin was inhaling to induce asthma breakout，meanwhile giving doxofyliine 50mg.kg-1.d-1 in low dose doxofyliine treated group ，100mg.kg-1 d-1 in moderate dose doxofyliine treated group，200 mg.kg-1 d-1 in high dose doxofyliine treated group . After the last inhaling ovalbumin ，the airway pressure was detected by the animal respirator. WBC counts in bronchoalveolar lavage fluid（BLAF） and lung specimen analysis were used to describe lung tissue inflammation .The expression of NF-κB subunit in cell nucleus of lung tissue was measured by immunohistochemistry.Results Lung tissue specimen analysis region indicated that the severity of allergic inflammation was reduced in group C、D、E. the number of total WBC in BALF was lower than group B.the number of total WBC in BALF was（30.4±3.2）X108/L in group C，（10.9±3.8 ）X108/L in group D，（8.5±2.3）X108/L in group E， （70.5±8.4 ）X108/L in group B，（ P<0.05 ）. The number （ ×103 /mm2 ） of cells with nuclear staining of NF-кB per square millimeter of submucosal region around large bronchus group C （2.5±0.5） ， group D （1.1±0.1）， group E （0.9±0.08）was lower than that in group B （4.3 ±0.5） ， P < 0.05）.Conclusion： doxofyliine han an obvious protective role airway inflammation. doxofyliine inhibited NF-κB transcriptional activity to exert anti-inflammatory effect. 【Key words】 doxofyliine ；asthma；guineapig； NF-κBp65；
哮喘是一种气道的慢性炎症。气道的炎症反应、过量的或不适当的细胞因子分泌导致组织炎症产生[1]。大多数细胞因子的基因是通过调节激活来表达的。因此在基因转录水平上抑制过度表达的炎症因子可能是哮喘颇有前景的治疗措施。核因子-KappaB（nuclear factor Kappa B，NF-κB）是免疫和炎症反应中的一个重要转录因子[2]。研究已证实，多索茶碱可直接抑制前炎因子的产生，为观察多索茶碱对哮喘炎症的保护作用及可能机制，2010年9月-2011年3月， 我们采用豚鼠建立哮喘动物的模型， 观察不同剂量多索茶碱对哮喘动物是否具有保护作用和多索茶碱是否是通过抑制NF-κB的活性来达到抗炎作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料及分组
健康实验豚鼠40只（购自桂林医学院动物实验中心），雄性，体重300±200g，正常对照组（A组），哮喘模型组（B组），多索茶碱低剂量治疗组（C组），多索茶碱中剂量治疗组（D组），多索茶碱高剂量治疗组（E组）。每组8只。
1.2 药品试剂及仪器
鸡卵白蛋白（OVA，Grade V ，）购自美国Sigma公司，多索茶碱片由宁波市天衡制药有限公司生产，（生产批号：国药准字H20000076）压缩雾化机购自德国百瑞（INQUA NEB plus）。
2、 实验方法
2.1 哮喘豚鼠模型的制作： 于实验的第1、8、15天，予鸡卵白蛋白（OVA） 10mg同时佐以氢氧化铝10mg作为变应原溶于1ml0.9%氯化钠，注入哮喘组和干预组的豚鼠的腹腔致敏。A组在同样的时间，用同样的方法注射等量的0.9%氯化钠。于19，20，21天雾化吸入0.9%氯化钠稀释的2%OVA，30min/天。C，D，E，组的动物雾化吸入2%OVA的同时分别给予多索茶碱片50mg.kg-1.d-1，100mg.kg-1 d-1，200mg.kg-1 d-1，灌服。A组和B组给予同样体积的蒸馏水灌服。
2.2 呼吸道高反应测定
在末次雾化后，用1‰戊巴比妥5mL. kg-1腹腔麻醉，行气管切开并插管，连接动物呼吸机，频率60次.min，潮气量10ml. kg-1，气管插管的侧孔接压力感受器，经四道生理记录仪记录气管内压力。首先将0.9%氯化钠雾化喷入气道插管内记录作对照，然后将组胺从低质量浓度开始喷入，每种质量浓度雾化1min，随后立即测压，记录予0%（0.9%氯化钠），1%，2%质量浓度组胺时的呼吸压力。正常对照仅予0.9%氯化钠盐水吸入，并作记录。
2.3 支气管肺泡灌洗：打开胸腔，剥离左肺，用0.9%氯化钠每次3ml，共3次灌洗左肺，灌洗液离心后2ml重悬于D-Hanks液1mL，取1-2%冰乙酸溶解红细胞后进行白细胞总数计数，常规瑞氏-吉姆萨染色后作分类计数。
2.4 肺组织分析：将右肺中叶浸入10%中性福尔马林固定，石蜡包埋切片，常规HE染色，进行肺组织观察。
2.5 NF-κB 的表达 （免疫组织化学方法）：一抗选用小鼠抗人p65 单克隆抗体（ F26 ，美国Santa Cruz公司） ， 用抗NF-κB亚单位P65抗体进行免疫染色。在抗原热修复后用0.1%Titon X-100孵育切片以增加组织对抗原的通透性；在加入一抗后用20%鸡蛋清进一步封闭非特异结合。
2.6 数据处理和统计学分析LEICA Q550CW图像分析系统计算主支气管黏膜下层单位面积内细胞核染色NF-κB阳性的细胞数，所有的数据均用来表示。用非配对t检验的方法在SPSS软件下进行统计学处理。P <0.05被认为有统计学意义。
3.结果
3.1 各组豚鼠呼吸道高反应性（见表1）
3.2多索茶碱对哮喘豚鼠气道炎症的影响
各组豚鼠HE染色肺组织病理变化，A组豚鼠肺组织支气管上皮完整 ，无明显炎症细胞浸润。B组可见支气管黏膜上皮脱落 ， 支气管及血管周围大量炎性细胞浸润 ，以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞为主；C、D、 E组肺组织炎性细胞浸润均有减轻 ，炎症浸润的范围明显小于B。其中以 E组为显著，C、D组及E组支气管肺泡灌洗液中白细胞总数低于B组，各组间差异有统计学意义。（见表2）。
3.3多索茶碱对肺组织转录因子NF-κB表达的影响
C，D，E组动物主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达NF-κB的阳细胞数（×103/mm2）均低于B组；C，D，E组间呈剂量依赖性。但各组均高于A组（见表2）。
3.4各组实验结果比较
4.讨论
哮喘是嗜酸细胞，肥大细胞及淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症。细胞核因子-Kappa B（nuclear factor-[kappa]B，NF-κB）。是炎症基因转录过程中的调节因子，又称为转录因子。目前研究认为 NF-κB 信号通路参与了感染、炎症、免疫反应、细胞凋亡等多种病理过程，也是哮喘发病机制中最受人关注的信号转导系统[2]。
在本研究中，作者建立豚鼠哮喘模型，同时用不同剂量的多索茶碱进行干预治疗。用免疫组化方法检测各组豚鼠组织NF-κBp65 蛋白的表达即 NF-κBp65 在哮喘组表达明显高于正常对照组，提示 NF-κB 参与了哮喘的发病过程。这一结果与 Barnes 等[3] 发现哮喘患者气道中NF-κB 激活增加的结果一致。国内董亮等[4]研究同样发现支气管哮喘患者外周血单个核细胞（PBMC）中 NF-κB 活性顯著增加，说明这种转录因子以活化的形式出现在哮喘患者当中，而在正常人中以非活化形式存在。而相关动物实验显示NF-κB 抑制剂可以阻碍气道平滑肌增生并对抗气道重建[5] ，证明 NF-κB 在哮喘发病过程中对气道重塑也起着重要作用。鉴于 NF-κB 可以调控许多细胞因子、炎症介质的释放，故抑制 NF-κB 的活化，是目前研究减少哮喘患者炎症介质释放的新的作用靶点。 多索茶碱（ doxofyliine ） 是一种新型的甲基磺嘌呤衍生物，其抗支气管痉挛和镇咳作用均强于氨茶碱[6]， 能抑制磷酸二酯酶， 提高细胞内cAMP 浓度， 松弛支气管平滑肌。还能阻断腺苷受体， 解除支气管痉挛[7]。也有资料表明， 该药对脑内腺苷受体的亲和力低， 这可能是它解除支气管痉挛作用比氨茶碱强， 而无氨茶碱的中枢和心脏不良反应的原因[8] 。多索茶碱作用机制为[9]⑴抑制多种炎症介质、细胞因子的释放， 控制呼吸道慢性炎症的发展； ⑵抑制呼吸道平滑肌细胞内磷酸二酯酶激活蛋白酶A及G， 从而降低细胞内Ca2+的浓度和呼吸道张力。 同时田秀明等临床研究表明[10] 多索茶碱松弛支气管平滑肌作用是氨茶碱的10～15倍， 并且多索茶碱起效快，30min之内即可见效，见效后药效可持续时间长达12h。本研究显示 ，不同浓度的实验结果表明多索茶碱对哮喘豚鼠的气道炎症有保护作用，可以在不同程度减轻气道高反应性。各剂量多索茶碱干预组可以减轻哮喘豚鼠模型肺内炎症细胞范围，同时BALF中WBC总数明显下降。可明显减少主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达NF-κB阳性细胞数。以100 mg.kg-1.d，200mg.kg-.d1这两组的效果较为显著。说明多索茶碱对气道炎症抑制作用呈剂量依赖性，各组之间疗效比较差异有统计学意义（P<0.05）。另外多索茶碱治疗后气道高反应性及气道炎症不能恢复正常水平，说明多索茶碱治疗哮喘是有一定限度的。因此说明多索茶碱可通过抑制NF-кB的活性实现的抗过敏性气道炎症的作用，可以作为辅助用药参与哮喘的治疗。
基金项目：广西壮族自治区教育厅科研项目 桂教科研[2008]27号，合同号：200810LX465
广西壮族自治区卫生厅科研项目 桂卫科教[2008]25号，合同号：Z2008272
参考文献
[1]Vignola AV，Gagliardo R，Guerrera D，et al.New evidence of inflammation in asthma.Thorax，2000，55（suppl）：59-60.
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[3] Barnes PJ.， Adcock TM.， NF-kappa B：a pivotal role in asthma and a new target for therapy. Trends Pharmacol Sei[J]. 1997. 8：46-50.
[4]董亮， 肖 伟， 毕文祥， 等. 哮喘患者 PBMC 中 NF-κB 活性及血漿 IL-10 水平变化的研究. 山东医药[J]. 2000. 40（19）：6
[5]Eynott P R， Nath P， Leung S Y， et a1. Allergen induced inflammation and airway epithelial and smooth muscle cell proliferation：role of Jun N-terminal kinase. Br J Pharmacol[J]. 2003.140（8）：1373-1380.
[6]Cirillo R， Corssi E， Franzone JS. Doxofyliine， an Ant iasthmat ic Drug Lacking Aff inity f or Adensoine Receptors. Arch Int Pharmacodyn， 1998， 295： 221-237.
[7]Cirillo R， Barone D. Doxyf yll ine： an ant iasthmatic drug lacing af finit y f or adenosine recept ors. Arch Int Pharma-codyn Ther， 1988， 295： 221-231.
[8]Franzone JS， Cirillo R， Barone D， et al. Doxofyliine and theophylline are xanthines w ith partly diff erent mechar nisms of action in animals. Drugs Bxp Clin Res， 1998， 14： 479-483.
[9]杨红雨.多索茶碱治疗哮喘及慢性阻塞性肺病70例临床观察[J]. 沈阳医学院学报，2008，10（4）：226-227.
[10]田秀明，王春霞.多索茶碱扩张支气管临床疗效观察[J].中国误诊学杂志，2006，6（12）：2329-2330
【摘要】目的：通过建立哮喘豚鼠模型，检测哮喘豚鼠肺组织中NF-κBp65表达水平，探讨NF-κBp65在哮喘发病中的变化及不同剂量多索茶碱对其的影响。方法：将40只健康雄性豚鼠随机分成正常对照组（A组），哮喘模型组（B组），多索茶碱低剂量治疗组（C组），多索茶碱中剂量治疗组（D组），多索茶碱高剂量治疗组（E组）。B、C、D、E经鸡卵白蛋白（OVA）致敏后，给予OVA雾化吸入，诱发哮喘发作制作哮喘模型，多索茶碱低剂量组给予多索茶碱50mg.kg-1 .d-1，多索茶碱中剂量组及多索茶碱高剂量组分别给予多索茶碱100mg.kg-1 .d-1和200mg.kg-1 .d-1灌服。在末次雾化吸入OVA后，经动物呼吸机测定豚鼠呼吸道压力。用支气管肺泡灌洗液（BALF） 和肺组织病理分析的方法检测肺组织炎症；用免疫组织化学的方法检测NF-κB亚单位P65在细胞核内的表达。结果：肺组织病理切片显示C、D、E组肺组织炎症细胞浸润的范围较B组明显减小。C组 BALF中白细胞总数为 （30.4±3.2）X108/L ， D组 BALF中白细胞总数为（10.9±3.8）X108/L，E组 BALF中白细胞总数为（8.5±2.3）X108/L；B组为（70.5±8.4 ）X108/L，（ P<0.05）。C组主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达NF - κB阳性的细胞数为（2.5±0.5）X103个/mm ，D组为（1.1±0.1）X103个/mm， E组为（0.9±0.08）X103个/mm ，B组为（4.3±0.5）X103个/mm （ P< 0.05）。结论： 核因子N F - κB的激活在哮喘发病过程中具有重要作用。多索茶碱干预组BALF中自细胞总数较模型组降低，主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达 N F-κB阳性的细胞数明显减少，证明多索茶碱可明显减轻哮喘引起的气道炎症。多索茶碱能够抑制哮喘豚鼠核因子N F - κB的表达 ，这可能是治疗哮喘的机制之一。
【关键词】多索茶碱； NF-κB ； 哮喘； 豚鼠
The Effect of Doxofyliine on Expression of Nuclear Factor-kappa Bp65（NF-κBp65） in Asthmatic Guineapig
Zheng wei-hua， Peng juan， Zhou yong，Wang xin，Zhang hong
Department of Pediatrics ， The Affiliated Hospitol of Guilin Medical College，Guilin 541001，China
【Abstract】Objective：To investigate the expression of nuclear factor in the lung tissue of asthmatic guineapig and the effect of doxofyliine with different dose on NF-κBp65 expression，as well as to analyze its role in asthma Pathogenesis. Methods： Forty Guineapig were randomly divided into five groups. Group A （normal control group ，n = 8）， group B （ asthmatic model group， n = 8） ， group C （low dose doxofyliine treated group ， n = 8）， group D （moderate dose doxofyliine treated group， n = 8）， group E （high dose doxofyliine treated group， n = 8）. After ovalbumin irritated ， ovalbumin was inhaling to induce asthma breakout，meanwhile giving doxofyliine 50mg.kg-1.d-1 in low dose doxofyliine treated group ，100mg.kg-1 d-1 in moderate dose doxofyliine treated group，200 mg.kg-1 d-1 in high dose doxofyliine treated group . After the last inhaling ovalbumin ，the airway pressure was detected by the animal respirator. WBC counts in bronchoalveolar lavage fluid（BLAF） and lung specimen analysis were used to describe lung tissue inflammation .The expression of NF-κB subunit in cell nucleus of lung tissue was measured by immunohistochemistry.Results Lung tissue specimen analysis region indicated that the severity of allergic inflammation was reduced in group C、D、E. the number of total WBC in BALF was lower than group B.the number of total WBC in BALF was（30.4±3.2）X108/L in group C，（10.9±3.8 ）X108/L in group D，（8.5±2.3）X108/L in group E， （70.5±8.4 ）X108/L in group B，（ P<0.05 ）. The number （ ×103 /mm2 ） of cells with nuclear staining of NF-кB per square millimeter of submucosal region around large bronchus group C （2.5±0.5） ， group D （1.1±0.1）， group E （0.9±0.08）was lower than that in group B （4.3 ±0.5） ， P < 0.05）.Conclusion： doxofyliine han an obvious protective role airway inflammation. doxofyliine inhibited NF-κB transcriptional activity to exert anti-inflammatory effect. 【Key words】 doxofyliine ；asthma；guineapig； NF-κBp65；
哮喘是一种气道的慢性炎症。气道的炎症反应、过量的或不适当的细胞因子分泌导致组织炎症产生[1]。大多数细胞因子的基因是通过调节激活来表达的。因此在基因转录水平上抑制过度表达的炎症因子可能是哮喘颇有前景的治疗措施。核因子-KappaB（nuclear factor Kappa B，NF-κB）是免疫和炎症反应中的一个重要转录因子[2]。研究已证实，多索茶碱可直接抑制前炎因子的产生，为观察多索茶碱对哮喘炎症的保护作用及可能机制，2010年9月-2011年3月， 我们采用豚鼠建立哮喘动物的模型， 观察不同剂量多索茶碱对哮喘动物是否具有保护作用和多索茶碱是否是通过抑制NF-κB的活性来达到抗炎作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料及分组
健康实验豚鼠40只（购自桂林医学院动物实验中心），雄性，体重300±200g，正常对照组（A组），哮喘模型组（B组），多索茶碱低剂量治疗组（C组），多索茶碱中剂量治疗组（D组），多索茶碱高剂量治疗组（E组）。每组8只。
1.2 药品试剂及仪器
鸡卵白蛋白（OVA，Grade V ，）购自美国Sigma公司，多索茶碱片由宁波市天衡制药有限公司生产，（生产批号：国药准字H20000076）压缩雾化机购自德国百瑞（INQUA NEB plus）。
2、 实验方法
2.1 哮喘豚鼠模型的制作： 于实验的第1、8、15天，予鸡卵白蛋白（OVA） 10mg同时佐以氢氧化铝10mg作为变应原溶于1ml0.9%氯化钠，注入哮喘组和干预组的豚鼠的腹腔致敏。A组在同样的时间，用同样的方法注射等量的0.9%氯化钠。于19，20，21天雾化吸入0.9%氯化钠稀释的2%OVA，30min/天。C，D，E，组的动物雾化吸入2%OVA的同时分别给予多索茶碱片50mg.kg-1.d-1，100mg.kg-1 d-1，200mg.kg-1 d-1，灌服。A组和B组给予同样体积的蒸馏水灌服。
2.2 呼吸道高反应测定
在末次雾化后，用1‰戊巴比妥5mL. kg-1腹腔麻醉，行气管切开并插管，连接动物呼吸机，频率60次.min，潮气量10ml. kg-1，气管插管的侧孔接压力感受器，经四道生理记录仪记录气管内压力。首先将0.9%氯化钠雾化喷入气道插管内记录作对照，然后将组胺从低质量浓度开始喷入，每种质量浓度雾化1min，随后立即测压，记录予0%（0.9%氯化钠），1%，2%质量浓度组胺时的呼吸压力。正常对照仅予0.9%氯化钠盐水吸入，并作记录。
2.3 支气管肺泡灌洗：打开胸腔，剥离左肺，用0.9%氯化钠每次3ml，共3次灌洗左肺，灌洗液离心后2ml重悬于D-Hanks液1mL，取1-2%冰乙酸溶解红细胞后进行白细胞总数计数，常规瑞氏-吉姆萨染色后作分类计数。
2.4 肺组织分析：将右肺中叶浸入10%中性福尔马林固定，石蜡包埋切片，常规HE染色，进行肺组织观察。
2.5 NF-κB 的表达 （免疫组织化学方法）：一抗选用小鼠抗人p65 单克隆抗体（ F26 ，美国Santa Cruz公司） ， 用抗NF-κB亚单位P65抗体进行免疫染色。在抗原热修复后用0.1%Titon X-100孵育切片以增加组织对抗原的通透性；在加入一抗后用20%鸡蛋清进一步封闭非特异结合。
2.6 数据处理和统计学分析LEICA Q550CW图像分析系统计算主支气管黏膜下层单位面积内细胞核染色NF-κB阳性的细胞数，所有的数据均用来表示。用非配对t检验的方法在SPSS软件下进行统计学处理。P <0.05被认为有统计学意义。
3.结果
3.1 各组豚鼠呼吸道高反应性（见表1）
3.2多索茶碱对哮喘豚鼠气道炎症的影响
各组豚鼠HE染色肺组织病理变化，A组豚鼠肺组织支气管上皮完整 ，无明显炎症细胞浸润。B组可见支气管黏膜上皮脱落 ， 支气管及血管周围大量炎性细胞浸润 ，以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞为主；C、D、 E组肺组织炎性细胞浸润均有减轻 ，炎症浸润的范围明显小于B。其中以 E组为显著，C、D组及E组支气管肺泡灌洗液中白细胞总数低于B组，各组间差异有统计学意义。（见表2）。
3.3多索茶碱对肺组织转录因子NF-κB表达的影响
C，D，E组动物主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达NF-κB的阳细胞数（×103/mm2）均低于B组；C，D，E组间呈剂量依赖性。但各组均高于A组（见表2）。
3.4各组实验结果比较
4.讨论
哮喘是嗜酸细胞，肥大细胞及淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症。细胞核因子-Kappa B（nuclear factor-[kappa]B，NF-κB）。是炎症基因转录过程中的调节因子，又称为转录因子。目前研究认为 NF-κB 信号通路参与了感染、炎症、免疫反应、细胞凋亡等多种病理过程，也是哮喘发病机制中最受人关注的信号转导系统[2]。
在本研究中，作者建立豚鼠哮喘模型，同时用不同剂量的多索茶碱进行干预治疗。用免疫组化方法检测各组豚鼠组织NF-κBp65 蛋白的表达即 NF-κBp65 在哮喘组表达明显高于正常对照组，提示 NF-κB 参与了哮喘的发病过程。这一结果与 Barnes 等[3] 发现哮喘患者气道中NF-κB 激活增加的结果一致。国内董亮等[4]研究同样发现支气管哮喘患者外周血单个核细胞（PBMC）中 NF-κB 活性顯著增加，说明这种转录因子以活化的形式出现在哮喘患者当中，而在正常人中以非活化形式存在。而相关动物实验显示NF-κB 抑制剂可以阻碍气道平滑肌增生并对抗气道重建[5] ，证明 NF-κB 在哮喘发病过程中对气道重塑也起着重要作用。鉴于 NF-κB 可以调控许多细胞因子、炎症介质的释放，故抑制 NF-κB 的活化，是目前研究减少哮喘患者炎症介质释放的新的作用靶点。 多索茶碱（ doxofyliine ） 是一种新型的甲基磺嘌呤衍生物，其抗支气管痉挛和镇咳作用均强于氨茶碱[6]， 能抑制磷酸二酯酶， 提高细胞内cAMP 浓度， 松弛支气管平滑肌。还能阻断腺苷受体， 解除支气管痉挛[7]。也有资料表明， 该药对脑内腺苷受体的亲和力低， 这可能是它解除支气管痉挛作用比氨茶碱强， 而无氨茶碱的中枢和心脏不良反应的原因[8] 。多索茶碱作用机制为[9]⑴抑制多种炎症介质、细胞因子的释放， 控制呼吸道慢性炎症的发展； ⑵抑制呼吸道平滑肌细胞内磷酸二酯酶激活蛋白酶A及G， 从而降低细胞内Ca2+的浓度和呼吸道张力。 同时田秀明等临床研究表明[10] 多索茶碱松弛支气管平滑肌作用是氨茶碱的10～15倍， 并且多索茶碱起效快，30min之内即可见效，见效后药效可持续时间长达12h。本研究显示 ，不同浓度的实验结果表明多索茶碱对哮喘豚鼠的气道炎症有保护作用，可以在不同程度减轻气道高反应性。各剂量多索茶碱干预组可以减轻哮喘豚鼠模型肺内炎症细胞范围，同时BALF中WBC总数明显下降。可明显减少主支气管黏膜下层单位面积内细胞核表达NF-κB阳性细胞数。以100 mg.kg-1.d，200mg.kg-.d1这两组的效果较为显著。说明多索茶碱对气道炎症抑制作用呈剂量依赖性，各组之间疗效比较差异有统计学意义（P<0.05）。另外多索茶碱治疗后气道高反应性及气道炎症不能恢复正常水平，说明多索茶碱治疗哮喘是有一定限度的。因此说明多索茶碱可通过抑制NF-кB的活性实现的抗过敏性气道炎症的作用，可以作为辅助用药参与哮喘的治疗。
基金项目：广西壮族自治区教育厅科研项目 桂教科研[2008]27号，合同号：200810LX465
广西壮族自治区卫生厅科研项目 桂卫科教[2008]25号，合同号：Z2008272
参考文献
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