【摘 要】
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目的：构建磷酸化AKT1 （Ser473）位点突变真核表达载体,并检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路轴对胃癌细胞增殖的影响.方法：以带有pcDNA3.0-Flag标签的AKT1质粒为模板,扩增出AKT1 （Ser473A
【机 构】
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内蒙古医科大学基础医学院,解放军总医院普通外科,军事医学科学院生物工程研究所,神华神东总医院
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目的：构建磷酸化AKT1 （Ser473）位点突变真核表达载体,并检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路轴对胃癌细胞增殖的影响.方法：以带有pcDNA3.0-Flag标签的AKT1质粒为模板,扩增出AKT1 （Ser473A）（丝氨酸突变成丙氨酸）位点突变编码序列,将其插入pcDNA3.0-Flag载体中,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测其表达情况;将突变质粒与空载体分别转染胃癌细胞HGC-27,通过Western印迹检测其下游基因核转录因子κB（NF-κB）在蛋白水
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