【摘 要】
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目的：构建带myc标签的人M2型丙酮酸激酶（PKM2）的真核表达载体,并瞬时转染肿瘤细胞,初步探讨PKM2的生物学功能。方法：以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增PKM2基因,将其插入p XJ-4
【机 构】
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军事医学科学院附属医院泌尿外科,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院科技部
【基金项目】
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国家自然科学基金（31100604,81472589）, 北京市科技新星计划（Z141102001814055）, 北京市自然科学基金（7132155）, 军事医学科学院创新基金转化医学项目（ZHYX003）
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目的：构建带myc标签的人M2型丙酮酸激酶（PKM2）的真核表达载体,并瞬时转染肿瘤细胞,初步探讨PKM2的生物学功能。方法：以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增PKM2基因,将其插入p XJ-40-myc载体,双酶切和基因测序验证后转染人胚肾293T细胞,Western印迹验证表达;将重组基因和空载体分别转染人肾透明细胞癌Caki-1细胞,CCK8法测定并绘制细胞生长曲线。结果：从人乳腺文库中获得长约1500 bp的DNA片段,连接到p XJ-40-myc载体上,测序结果与目的序列完全一致;转染人胚肾
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