观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对体外培养的视网膜色素上皮(RPE)细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的调控作用。
方法将体外培养的RPE细胞分为PSF高表达组、PSF高表达对照组、PSF低表达组、PSF低表达对照组及假转染组。应用脂质体2000将上调PSF表达的真核质粒增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)-C2-PSF、下调PSF表达的真核质粒pGenesil-PSF-RNAi以0.25、0.50、1.00 μg的递增量分别转染至PSF高表达组及PSF低表达组细胞。PSF高表达对照组细胞转染pEGFP-C2空载质粒。PSF低表达对照组细胞转染pGenesil-scramble-siRNA质粒。假转染组仅做转染处理，不加入任何表达质粒。采用水溶性四氮唑法检测胰岛素样生长因子1(IGF-1)刺激条件下PSF对RPE细胞增生的影响。应用脂质体2000将0.50 μg真核质粒pEGFP-C2-PSF、1.00 μg真核质粒pGenesil-PSF-RNAi及pEGFP-C2空载质粒转染细胞分别作为PSF高表达组、PSF低表达组、对照组，采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测PSF对IGF-1诱导的RPE细胞内血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达的影响。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PSF对IGF-1诱导的磷酸化Akt(pAkt)蛋白表达的影响。在IGF-1刺激后，将RPE细胞分为单纯渥曼青霉素(Wortmannin)处理组、单纯PSF高表达组、渥曼青霉素联合PSF高表达处理组，并以未经渥曼青霉素处理的常规体外培养的RPE细胞为对照组，采用实时定量PCR检测各组VEGF的表达。
结果IGF-1刺激后，PSF高表达组、PSF高表达对照组及假转染组之间RPE细胞增生率比较，差异有统计学意义(F＝29.728，P<0.05)；PSF低表达组、PSF低表达对照组及假转染组之间RPE细胞增生率比较，差异有统计学意义(F＝14.121，P<0.05)。PSF高表达组RPE细胞中VEGF mRNA表达较对照组明显降低，差异有统计学意义(P＝0.000 3)；PSF低表达组RPE细胞中VEGF mRNA表达较对照组明显提高，差异有统计学意义(P＝0.030 9)。Western blot检测结果显示，IGF-1刺激可上调pAkt蛋白表达水平，PSF高表达可明显下调pAkt蛋白表达水平。IGF-1刺激后，渥曼青霉素联合PSF高表达处理组VEGF表达较单纯渥曼青霉素处理组明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论PSF能抑制IGF-1刺激后体外培养的RPE细胞中PI3K/Akt信号通路活化，下调VEGF表达。