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摘要：目的 建立测定消肿生肌膏中龙脑含量的气相色谱法。方法 使用气相色谱仪，聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m），FID检测器，载气为高纯氮气，采用程序升温，内标法测定含量。结果 龙脑在0.005 36～0.080 4 ?g范围内有良好的线性关系（r=0.999 6），平均回收率为98.62%（RSD=1.85%）。结论 本方法简便，灵敏度高，重复性好，结果准确，可用于消肿生肌膏的质量控制。
关键词：消肿生肌膏；气相色谱法；含量测定；龙脑
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0049-02
消肿生肌膏为广州中医药大学第一附属医院院内制剂，由氧化锌、冰片、硼酸、黄丹等6味药组成，具有消肿止痛、化腐生肌等功效，用于治疗痔术后、瘘术后创口较大，愈合迟缓等皮肤疾患。鉴于天然冰片资源稀缺、价格昂贵，本膏剂在制备过程中采用合成冰片来取代天然冰片。合成冰片主要含有龙脑、异龙脑，其中龙脑不仅为冰片的活性成分，也是制剂的主要药效成分。为更全面地控制产品的内在质量，确保临床疗效，本研究采用毛细管气相色谱内标法[1-2]测定消肿生肌膏中龙脑的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
美国VARIAN-3900气相色谱仪（FID Detector），Varian Star Chromatography Workstation Version 6.0数据处理系统；聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；BP210S型电子分析天平（赛多利斯）。
龙脑对照品（批号111688-200501，中国药品生物制品检定所）；消肿生肌膏（批号20110205、20110301、20110407、20110601、20110609，广州中医药大学第一附属医院提供）；氮气为高纯氮，氮气、氢气和空气均购自广东华明经营商行；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；柱流量：1.0 mL/min；载气：N2为25 mL/min，H2为30 mL/min，空气为300 mL/min；色谱柱程序升温：初始温度110 ℃，保留0.5 min，以30 ℃/min升温至140 ℃，保持2 min，再以50 ℃/min升温至190 ℃，保持1.5 min，最后以20 ℃/min升温至205 ℃，保持1 min；检测器280 ℃，进样口230 ℃；分流比为20∶1；进样量：1 ?L。
2.2 溶液的制备
2.2.1 内标溶液的制备 取正十八烷约4 mg，精密称定，置10 mL的量瓶中，加石油醚至刻度，即得。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取龙脑对照品1.34 mg，置5 mL的量瓶中，加内标溶液0.5 mL，石油醚稀释至刻度，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品0.5 g，置100 mL圆底烧瓶中，加3 mL石油醚将其溶解，再加水30 mL；由挥发油测器上端加水5 mL，再加石油醚2 mL；加热至沸腾，保持微沸4 h；分液漏斗分取石油醚层，转入已加适量无水硫酸钠的试管中，再将试管中的石油醚转入10 mL量瓶中，加石油醚至刻度；精密吸取2 mL及内标溶液0.2 mL，置10 mL量瓶中，加石油醚至刻度，摇匀，即得。
2.2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方比例及制法，制成缺冰片的阴性对照品，按“2.2.3”项下方法制备缺冰片的阴性对照品溶液。
2.3 专属性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各1 ?L，按“2.1”项下色谱条件进样分析，色谱图见图1。结果表明，对照品与供试品中龙脑的保留时间基本一致，龙脑色峰与内标峰及其他组分峰分离良好，阴性对照溶液在龙脑色谱峰位置处无相应的峰出现，表明阴性对照无干扰。
2.4 线性关系考察
精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.1、1.5 mL至5 mL容量瓶中，精密加入内标溶液0.2 mL，石油醚稀释至刻度。分别吸取上述对照品溶液1 ?L进样，按“2.1”项下色谱条件测定，以对照品与内标物的峰面积比（A对照品/A内标）为纵坐标，进样量（m对照品/m内标）为横坐标，绘制标准曲线。龙脑回归方程：Y=1.004 4X-0.000 6，r2=0.999 6。结果表明，龙脑的检测量在0.005 36～0.080 4 ?g范围内与其同内标的峰面积比值呈良好线性关系。
2.5 校正因子计算
精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.5 mL至5 mL容量瓶中，精密加入内标溶液0.2 mL，石油醚稀释至刻度。按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，计算校正因子。结果显示，龙脑的平均校正因子为1.21（RSD=1.96%）。
2.6 精密度试验
精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.2 mL至5 mL容量瓶中，精密加入内标溶液0.2 mL，石油醚稀释至刻度。按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，以对照品与内标物峰面积比（A对照品/A内标）计算精密度，测得A龙脑/A内标=0.110 8（RSD=1.93%，n=6），表明本方法的精密度良好。
2.7 稳定性试验
称取消肿生肌膏（批号20110609）约0.50 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、8、12、24 h测定，结果显示，A龙脑/A内标=0.087 7（RSD=1.71%），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.8 加样回收率试验
精密称取已测含量的消肿生肌膏（批号20110609）约0.10 g， 共6份，精密加入适量对照品，按“2.2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件测定含量，并计算加样回收率，结果见表1。结果显示，龙脑回收率为98.62%（RSD=1.85%），说明本法符合方法分析学要求。
2.9 样品含量测定
取5批次的消肿生肌膏各约0.2 g，精密称重，按“2.2.3”项下方法制备，照“2.1”项下色谱条件测定，计算龙脑含量，结果5批消肿生肌膏中的龙脑含量分别为（0.55±0.24）%、（0.52±0.31）%、（0.56±0.12）%、（0.58±0.43）%、（0.60±0.21）%。根据结果可知，本制剂中龙脑的含量不低于0.51%。
3 讨论
消肿生肌膏中挥发油的提取时间由预实结果确定；用挥发油提取器提取挥发油，记录不同时间挥发油提取量至挥发油不再增加，以提取总量98%以上的挥发油所需的时间作为制备供试品中挥发油的提取时间，平均达到3.5 h以上，故本试验挥发油的提取时间确定为4 h。但在大生产中，考虑到药材之间互相影响、仪器设备的耐受性以及经济成本等问题，常以提取总量80%～90%的挥发油所需的时间作为制备工艺中挥发油提取时间。
本试验考察了3种不同商品规格的色谱柱：ZB-WAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 ?m）、聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）、Agilent DB-35MS毛细管色谱柱，结果发现聚乙二醇20M交联柱能使龙脑色峰与内标峰及其他组分峰在短时间内完全分离（峰分离度均大于1.5），理论板数均不小于5 000，符合药典要求，因此以聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）作为本品试验用色谱柱。
消肿生肌膏为临床验方，其质量标准目前尚未确定。本试验建立了测定该制剂中有效成分龙脑含量的方法——程序升温气相色谱法，该法简便、准确、重复性好，可以作为消肿生肌膏的质量控制方法。对于方中其他有效成分，还有待建立快速有效的鉴别方法，以进一步完善其质量控制标准。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录38-39.
[2] 张淼，袁浩，冯丽.GC法测定拨云散眼药中龙脑、异龙脑的含量[J].中国药事，2011，25（1）：79-80.
（收稿日期：2011-09-05，编辑：陈静）
关键词：消肿生肌膏；气相色谱法；含量测定；龙脑
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0049-02
消肿生肌膏为广州中医药大学第一附属医院院内制剂，由氧化锌、冰片、硼酸、黄丹等6味药组成，具有消肿止痛、化腐生肌等功效，用于治疗痔术后、瘘术后创口较大，愈合迟缓等皮肤疾患。鉴于天然冰片资源稀缺、价格昂贵，本膏剂在制备过程中采用合成冰片来取代天然冰片。合成冰片主要含有龙脑、异龙脑，其中龙脑不仅为冰片的活性成分，也是制剂的主要药效成分。为更全面地控制产品的内在质量，确保临床疗效，本研究采用毛细管气相色谱内标法[1-2]测定消肿生肌膏中龙脑的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
美国VARIAN-3900气相色谱仪（FID Detector），Varian Star Chromatography Workstation Version 6.0数据处理系统；聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；BP210S型电子分析天平（赛多利斯）。
龙脑对照品（批号111688-200501，中国药品生物制品检定所）；消肿生肌膏（批号20110205、20110301、20110407、20110601、20110609，广州中医药大学第一附属医院提供）；氮气为高纯氮，氮气、氢气和空气均购自广东华明经营商行；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；柱流量：1.0 mL/min；载气：N2为25 mL/min，H2为30 mL/min，空气为300 mL/min；色谱柱程序升温：初始温度110 ℃，保留0.5 min，以30 ℃/min升温至140 ℃，保持2 min，再以50 ℃/min升温至190 ℃，保持1.5 min，最后以20 ℃/min升温至205 ℃，保持1 min；检测器280 ℃，进样口230 ℃；分流比为20∶1；进样量：1 ?L。
2.2 溶液的制备
2.2.1 内标溶液的制备 取正十八烷约4 mg，精密称定，置10 mL的量瓶中，加石油醚至刻度，即得。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取龙脑对照品1.34 mg，置5 mL的量瓶中，加内标溶液0.5 mL，石油醚稀释至刻度，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品0.5 g，置100 mL圆底烧瓶中，加3 mL石油醚将其溶解，再加水30 mL；由挥发油测器上端加水5 mL，再加石油醚2 mL；加热至沸腾，保持微沸4 h；分液漏斗分取石油醚层，转入已加适量无水硫酸钠的试管中，再将试管中的石油醚转入10 mL量瓶中，加石油醚至刻度；精密吸取2 mL及内标溶液0.2 mL，置10 mL量瓶中，加石油醚至刻度，摇匀，即得。
2.2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方比例及制法，制成缺冰片的阴性对照品，按“2.2.3”项下方法制备缺冰片的阴性对照品溶液。
2.3 专属性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各1 ?L，按“2.1”项下色谱条件进样分析，色谱图见图1。结果表明，对照品与供试品中龙脑的保留时间基本一致，龙脑色峰与内标峰及其他组分峰分离良好，阴性对照溶液在龙脑色谱峰位置处无相应的峰出现，表明阴性对照无干扰。
2.4 线性关系考察
精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.1、1.5 mL至5 mL容量瓶中，精密加入内标溶液0.2 mL，石油醚稀释至刻度。分别吸取上述对照品溶液1 ?L进样，按“2.1”项下色谱条件测定，以对照品与内标物的峰面积比（A对照品/A内标）为纵坐标，进样量（m对照品/m内标）为横坐标，绘制标准曲线。龙脑回归方程：Y=1.004 4X-0.000 6，r2=0.999 6。结果表明，龙脑的检测量在0.005 36～0.080 4 ?g范围内与其同内标的峰面积比值呈良好线性关系。
2.5 校正因子计算
精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.5 mL至5 mL容量瓶中，精密加入内标溶液0.2 mL，石油醚稀释至刻度。按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，计算校正因子。结果显示，龙脑的平均校正因子为1.21（RSD=1.96%）。
2.6 精密度试验
精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.2 mL至5 mL容量瓶中，精密加入内标溶液0.2 mL，石油醚稀释至刻度。按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，以对照品与内标物峰面积比（A对照品/A内标）计算精密度，测得A龙脑/A内标=0.110 8（RSD=1.93%，n=6），表明本方法的精密度良好。
2.7 稳定性试验
称取消肿生肌膏（批号20110609）约0.50 g，精密称定，按“2.2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、8、12、24 h测定，结果显示，A龙脑/A内标=0.087 7（RSD=1.71%），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.8 加样回收率试验
精密称取已测含量的消肿生肌膏（批号20110609）约0.10 g， 共6份，精密加入适量对照品，按“2.2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件测定含量，并计算加样回收率，结果见表1。结果显示，龙脑回收率为98.62%（RSD=1.85%），说明本法符合方法分析学要求。
2.9 样品含量测定
取5批次的消肿生肌膏各约0.2 g，精密称重，按“2.2.3”项下方法制备，照“2.1”项下色谱条件测定，计算龙脑含量，结果5批消肿生肌膏中的龙脑含量分别为（0.55±0.24）%、（0.52±0.31）%、（0.56±0.12）%、（0.58±0.43）%、（0.60±0.21）%。根据结果可知，本制剂中龙脑的含量不低于0.51%。
3 讨论
消肿生肌膏中挥发油的提取时间由预实结果确定；用挥发油提取器提取挥发油，记录不同时间挥发油提取量至挥发油不再增加，以提取总量98%以上的挥发油所需的时间作为制备供试品中挥发油的提取时间，平均达到3.5 h以上，故本试验挥发油的提取时间确定为4 h。但在大生产中，考虑到药材之间互相影响、仪器设备的耐受性以及经济成本等问题，常以提取总量80%～90%的挥发油所需的时间作为制备工艺中挥发油提取时间。
本试验考察了3种不同商品规格的色谱柱：ZB-WAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 ?m）、聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）、Agilent DB-35MS毛细管色谱柱，结果发现聚乙二醇20M交联柱能使龙脑色峰与内标峰及其他组分峰在短时间内完全分离（峰分离度均大于1.5），理论板数均不小于5 000，符合药典要求，因此以聚乙二醇20M交联柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）作为本品试验用色谱柱。
消肿生肌膏为临床验方，其质量标准目前尚未确定。本试验建立了测定该制剂中有效成分龙脑含量的方法——程序升温气相色谱法，该法简便、准确、重复性好，可以作为消肿生肌膏的质量控制方法。对于方中其他有效成分，还有待建立快速有效的鉴别方法，以进一步完善其质量控制标准。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录38-39.
[2] 张淼，袁浩，冯丽.GC法测定拨云散眼药中龙脑、异龙脑的含量[J].中国药事，2011，25（1）：79-80.
（收稿日期：2011-09-05，编辑：陈静）