中国松材线虫病现状及检疫方法

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  摘要介绍了松材线虫病的致病机理,并总结了其检疫方法及最新检测技术,以期为松材线虫病的检疫及防治提供参考。
  关键词松材线虫;致病机理;检疫方法
  中图分类号S763.37文献标识码B文章编号 1007-5739(2011)09-0177-01
  
  松材线虫(Bursphelenchus xylophilus)病是世界上最具危险性的检疫性植物病害,被誉为松树的癌症。松材线虫为线虫门(Nematoda),侧尾腺纲(Secernentea),垫刃目(Tylen-chida),滑刃总科(Aphelenchoidoidea),寄生滑刃科(Parasita-phelenchidae),伞滑刃亚科(Bursaphelenchinae),伞滑刃属(Bursaphelenchus)[1]。该病害的传播方式一般是人为的,主要是在调运松类植物及其产品过程中传播的。其不断扩散蔓延的原因,主要是调运过程中的检测不到位,未能及时发现病害,错过了防治的有效期。每年我国由松材线虫病而造成的直接经济损失已达25亿元,间接的经济损失达250亿元[2]。
  1松材线虫病的致病机理
  松材线虫病的传播媒介是松褐天牛(Monochamus alter-natus),其通过松褐天牛携带病原体松材线虫而导致松树染病。因此,应根据松树、松材线虫、松褐天牛三者之间的相互关系制定适宜的防治对策。另外,细菌参与学说表明,松材线虫与细菌的共同参与也是诱使松树发病的必要条件。在此,认为松材线虫只是作为细菌的运输载体,而细菌才是真正的病原体。同时还有另一种看法,坚持病害的诱因是松材线虫和细菌共同作用的。虽然根据目前的最新研究,细菌参与学说可以对松树、松材线虫、松褐天牛三者之间的关系进行深刻地评价。但是,目前细菌参与学说还只是一种假说,还必须通过更多的试验来了解松材线虫病的本质,进一步揭示其致病机理[3]。
  2松材线虫病的检疫方法
  作为松材线虫为害的最早检测方法,流胶法在病害发生区或疫区诊断病树方面发挥了较大的作用,但该方法的准确性存在缺陷,因为很多因素都可以影响松树流脂。松材线虫的形态学鉴定方法虽然在我国口岸检疫中应用较多,但该方法依然存在问题,常出现错检和漏检现象,主要是因为松材线虫与拟松材线虫形态非常相像,形态学鉴定很难区分,尤其使得幼虫鉴定准确性更低。为了更加准确、快速地检测这一病害,pH值检测法、纤维素酶扩散检测法均被学者尝试过,但这些方法的应用效果都不是很理想,在松材线虫生长发育期、虫口数量、实验条件稳定性等方面都受到一定的制约,实用性表现不好。
  近些年,分子生物学和生物技术发展势头迅猛,为松材线虫的检测提供了一条新途径,弥补了以上方法的缺陷。研究人员开始应用分子生物学的方法来检测松材线虫,如PCR-RAPD、PCR-RFLP和PCR-SSCP技术等。虽然这些方法具有较高的准确性,但其在技术和实验条件方面要求较高,使其不可能在基层松材线虫病监测和监管工作中推广使用;同时,上述方法检测时间较长,都需要把病木样本中的线虫先分离出来再检测,这样就降低了口岸木材与木质包装的检疫通关效率。因此,缺少简单、快速、准确的检测方法依然是制约该病防治工作的首要因素,是目前在生产中亟需解决的问题[4]。
  3松材线虫病的最新检测技术
  3.1线虫的培养技术
  在进行检疫时,有很大一部分松材线虫是处于卵的状态,在普通显微镜下很难分辨,进而导致松材线虫进入境内,因此需要对可疑的木材进行真菌培养,以提高口岸检疫的成功率。经试验,同等条件下松材线虫在灰葡萄孢菌中的繁殖效果最好。把疑似含有松材线虫的木材做成长和宽均为5 cm的样本,用纱布包裹起来,置于直径为10 cm的烧杯中,然后置于25~28 ℃的培养箱内,并定期浇水保持湿润。每天收集烧杯底部积水并观察有无松材线虫成虫。
  3.2线虫的分离技术
  新型的线虫分离器的产生,满足了提高线虫的分离效率的要求,其结合了贝尔曼漏斗和浅盘法二者的优势,具有方便、快捷、经济及高效等特点。该分离器分离出100 g病木中超过70%的病原线虫所需时间较短,24 h内即可完成,其获得较纯净的线虫分离液主要是在乳胶管末端进行收集。该分离器的使用较浅盘法分离线虫省工节本,其分离过程不需要使用400目线虫网筛,而且过筛时的线虫很少丢失,使分离率进一步提高;该分离器的使用较贝尔曼漏斗法分离线虫更加高效,通过其分离器上直径18 cm/10目的网筛可以实现一次性分离很多样品,而且可以逸出大量的线虫,分离效率非常高。该分离器的构成为一体化设计,因此在冬季使用时,可以轻松进出保温保湿培养箱[5]。
  3.3线虫的形态鉴定方法
  松材线虫个体小(成虫体长<1 mm),肉眼难以看到。在显微镜下可以观察到松材线虫的雌虫和雄虫的形态特征。雌虫的形态特征如下:虫体细长,头部高,缢缩显著;口针基部稍微膨大;排泄孔位于食道和肠交界处,偶尔位于神经环处,半月体位于中食道球后约1个体宽处。阴门位置较后,阴门前唇向后延伸形成阴门盖,多数个体有明显的尾尖突,长约0.5~2.9 μm,平均长度为1.7 μm。雄虫的形态特征如下:虫体后部向腹部弯曲,虫体呈“J”形;体前部与雌虫相似;交合刺大,显著弯成弓状,基顶钝圆,基喙显著,锐尖,远端有盘状突;尾弯成弓状,尾端尖,有1个小的端生交合伞[6]。根据以上方法可以在口岸形成松材线虫培养、分离和鉴定的快速方法,既缩短了松材线虫检疫的时间,又可以提高口岸松材线虫的检出率,更好地为国门把关,确保农业生产和生态环境的安全。
  4参考文献
  [1] GU L,ZHANG J C.Bursaphelenchus singaporensis sp.n.(Nematoda:Para-sitaphelenchidae) in packagingwood from Singapore-a new species of the B[J]. xylophilus group.Zootaxa,2005(988):1-12.
  [2] 范军祥,黄焕华,钱明惠,等.松材线虫病的诊断方法探讨[J].广东林业科技,2008,24(5):52-55.
  [3] 姚圣忠.松材线虫病的细菌参与学说[J].河北林业科技,2008(6):77-79.
  [4] 王明旭,张志飞,罗宽何,等.松材线虫快速检测技术方法的比较研究[J].湖南农业大学学报,2004,30(3):239-242.
  [5] 崔建臣,张建华,张桂娟.改进型线虫分离器分离线虫及计数方法比较[J].植物检疫,2004,18(5):275-276.
  [6] 郑炜,顾建峰,吴昊,等.宁波马尾松中松材线虫形态变异研究[J].浙江林业科技,2007,27(3):38-41.
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