探讨微小RNA(miR)-520b靶向调节肝脏磷酸果糖激酶(PFKL)在胰腺癌细胞侵袭及凋亡中的机制。
方法将细胞分为空白组、阴性对照组、miR-520b阳性组、miR-520b抑制组和siRNA-PFKL组，每组重复3次。实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测miR-520b和PFKL基因相对表达量；蛋白质印迹法(Western blot)检测PFKL及上皮-间充质转化(EMT)相关分子蛋白分子水平；细胞体外侵袭实验(Transwell)和流式细胞技术分别检测细胞侵袭和凋亡能力。
结果荧光素酶报告基因检测发现，在野生型PFKL中，miR-520b阳性组(0.25±0.04)的荧光素酶活性较阴性对照组(0.92±0.09)显著降低(P<0.05)，而在突变型PFKL中差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组[PFKL：1.72±0.13，N-钙黏蛋白(N-cadherin)：1.36±0.10，E-钙黏蛋白(E-cadherin)：1.27±0.09、β-连环蛋白(β-catenin)：0.36±0.04、Snail：1.35±0.12、侵袭：(23.27±3.18)个/HF、凋亡：(9.89±0.72)%]和阴性对照组[PFKL：1.61±0.12，N-cadherin：1.40±0.11，E-cadherin：1.26±0.08、β-catenin：0.38±0.05、Snail：1.30±0.10、侵袭：(21.92±3.65)个/HF、凋亡：(10.67±0.69)%]比较，miR-520b阳性组[PFKL：0.12±0.01，N-cadherin：0.30±0.03，E-cadherin：2.42±0.21、β-catenin：0.19±0.02、Snail：0.40±0.07、侵袭：(12.13±1.39)个/HF、凋亡：(25.83±2.15)%]和siRNA-PFKL组[PFKL：0.11±0.01，N-cadherin：0.25±0.02，E-cadherin：2.53±0.24、β-catenin：0.26±0.05、Snail：0.22±0.04、侵袭：(13.91±1.10)个/HF、凋亡：(23.91±1.99)%]E-cadherin蛋白和CFPAC-1细胞凋亡水平显著增高，PFKL、N-cadherin、β-catenin、Snail蛋白和细胞侵袭水平显著减低(P<0.05)；miR-520b抑制组[PFKL：3.47±0.25，N-cadherin：3.39±0.20，E-cadherin：0.49±0.03、β-catenin：2.11±0.15、Snail：2.05±0.22、侵袭：(43.22±7.85)个/HF、凋亡：(2.41±0.18)%]E-cadherin蛋白和CFPAC-1细胞凋亡水平显著降低，PFKL、N-cadherin、β-catenin、Snail蛋白和细胞侵袭水平显著增高(P<0.05)。
结论miR-520b可抑制胰腺癌细胞的侵袭并促进其凋亡，其机制与调控靶基因PFKL密切相关。