【摘 要】
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目的 利用RNA干扰技术抑制乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因的表达并提高对阿霉素(ADR)的敏感性.方法 针对BCRP的mRNA序列,设计两条RNA干扰链(BCRP-A和BCR
【机 构】
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430014,武汉市中心医院甲状腺乳腺外科
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目的 利用RNA干扰技术抑制乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因的表达并提高对阿霉素(ADR)的敏感性.方法 针对BCRP的mRNA序列,设计两条RNA干扰链(BCRP-A和BCRP-B),构建出小干扰RNA(siRNA)表达载体pG-BCRP-A siRNA-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和pG-BCRP-B siRNA-EGFP.实验分为4组:A、B、C3组分别转染BCRP-A、BCRP-B、HK-siRNA(对照组);D组转染过程中未加入任何质粒(空白组).通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测siRNA阻断BCRP基因表达的效率,应用噻唑蓝(MTT)法分析siRNA干扰后MCF-7/ADR的耐药性变化.结果 RT-PCR和Western blot法检测结果表明BCRP-A和BCRP-B两条干扰链干扰效率不一,前者较后者对BCRP mRNA和蛋白质表达抑制率均明显优于后(P＜0.05);MTT法分析结果说明BCRP-A组对ADR的药物敏感性明显提高,其IC50为(184.6±25.3) ng/ml,与BCRP-B干扰组和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RNA干扰技术可用于抑制BCRP基因的表达,并提高对ADR的敏感性,但不同干扰链的干扰效率差异较大.
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