【摘 要】
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目的:建立Real-time PCR方法,用于定量检测重组技术产品中宿主基因组DNA的残留。方法:以ABI 7500 FAST平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划),课题编号:2007AA021204
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目的:建立Real-time PCR方法,用于定量检测重组技术产品中宿主基因组DNA的残留。方法:以ABI 7500 FAST平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立基于SYBRGreenI荧光染料的real-timePCR检测方法,用于重组技术产品宿主DNA残留的质量控制。结果:该法检测宿主DNA残留灵敏度可达到1fg(1×10-6ng),DNA浓度在1×10-5～100ng.μL-1范围内线性良好,其标准曲线的相关系数为0.99以上。应用该法对4批重组人粒细胞刺激因子进行测定,外源DNA残留量分别为每剂量6.699×10-3,7.948×10-3,9.362×10-3,7.506×10-3ng。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高等优点,可用于重组产品中大肠杆菌残余DNA的定量测定。
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