【摘 要】
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目的 构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法 构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白的表达。将环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）响应元
【基金项目】
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湖北省教育厅科学研究计划指导性项目（No B2021224）；
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目的 构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法 构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白的表达。将环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）响应元件报告基因转染HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞,不同浓度的GLP-1刺激后,用一步法荧光素酶报告基因检测试剂盒检测发光值反映细胞cAMP水平,采用cAMP试剂盒（ELISA）进行验证。结果 成功构建HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。不同浓度GLP-1刺激后,发光值变化趋势与细胞cAMP水平变化趋势相似。本实验中Z′因子的值为0.52。结论 本研究建立了基于重组HEK293T细胞株,其可用于GLP-1受体激动剂高通量筛选。
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