【摘 要】
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[目的]探讨软骨细胞外基质微环境对源于人脐带Wharton胶的间充质干细胞增殖的影响,观察该微环境促进干细胞向软骨细胞方向分化的潜能.[方法]①取3％ (w/v)猪关节软骨细胞外基质
【机 构】
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解放军总医院骨科研究所,北京100853“,”黑龙江佳木斯大学附属第一医院 154007“,”解放军总医院骨科研究所,北京,100853
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[目的]探讨软骨细胞外基质微环境对源于人脐带Wharton胶的间充质干细胞增殖的影响,观察该微环境促进干细胞向软骨细胞方向分化的潜能.[方法]①取3％ (w/v)猪关节软骨细胞外基质和2.4％ (w/v)海藻酸盐为原料,按体积比1∶1的比例充分混合,将其用带16G针头的1 ml注射器匀速滴入氯化钙溶液制作软骨细胞外基质/海藻酸盐混合凝胶微球,通过扫描电镜观察该微球内部结构.②将人脐带Wharton胶中间质干细胞(WJMSCs)混于软骨细胞外基质/海藻酸混合液,滴入氯化钙溶液形成复合干细胞的混合凝胶微球进行培养,设为实验组；同理WJMSCs混合于单纯藻酸盐凝胶并形成微球作为对照组.③通过扫描电镜和FDA-PI染色观察上述两组微球内细胞的生长粘附情况,体外培养4周,经组织学和DNA测定观察干细胞的表型及增殖情况.[结果]①构建的软骨细胞外基质/海藻酸盐混合凝胶微球呈半透明乳白色,内部具有较多不规则的孔隙结构,具有三维立体培养细胞的环境特点.②比较实验组和对照组不同细胞培养时间段细胞增殖量,发现实验组细胞增殖率高于对照组,第28 d时两组细胞DNA含量的差异有统计学意义,(P＜0.05).③实验组中细胞呈圆形或椭圆形,形成明显的软骨陷窝样的结构,有大量细胞外基质分泌,对照组中细胞呈圆形,陷窝样的结构不明显.④组织学染色观察发现:实验组中培养的干细胞明显有向软骨细胞方向分化的趋势.[结论]软骨细胞外基质微环境不仅利于人脐带Wharton胶中间质干细胞的增殖,而且具有将WJMSCs向软骨细胞方向诱导分化的潜能.
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