带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定

来源 :病毒学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：guaiwa

【摘要】

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构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA（rMVA）。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质

【作者】

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李莉莉王湛周玉柏张芳沈思嗣李泽琳曾毅

【机构】

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北京工业大学生命科学与生物工程学院,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

【出处】

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病毒学报

【发表日期】

：

2015年5期

【关键词】

：

穿梭质粒 MVA 标记基因同源重组 HPV 疫苗 Shuttle plasmid Modified vaccinia virus Ankara （MVA）

【基金项目】

：

北京市教委科技创新平台（PXM2014_014204_07_000048）, 食管癌血清学早期诊断和人乳头瘤病毒（HPV）新型疫苗的研发（2012AA02A404）863项目, 国家科技重大专项（2012ZX10001005）, 北京市教委科技创新平台（PXM2014_014204_07_000046）

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构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA（rMVA）。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两侧插入TKL的同源序列。pZL-EGFP与MVA病毒共转染BHK-21细胞后经10代传代,一次噬斑筛选以获得携带有外源基因且EGFP已被删除的rMVA。最终获得的rMVA通过PCR和Western Blot方法对pZL-EGFP的功能进行鉴定。成功构

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