【摘 要】
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目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体中的微小RNA-92b(miR-92b)对三阴性乳腺癌细胞自噬的影响及机制。方法 THP-1被诱导细胞分化为M0、M1、M2型巨噬细胞,提取其所分泌的外泌体以及转染miR-92b mimic、Negative Control的M2型巨噬细胞所分泌的外泌体;将10μg·mL-1的上述外泌体以及等体积的磷酸盐缓冲液与MDA-MB-231共孵育48 h(M0 exo组、M
【基金项目】
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辽宁省教育厅科学技术研究基金资助项目(LK201604);
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目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体中的微小RNA-92b(miR-92b)对三阴性乳腺癌细胞自噬的影响及机制。方法 THP-1被诱导细胞分化为M0、M1、M2型巨噬细胞,提取其所分泌的外泌体以及转染miR-92b mimic、Negative Control的M2型巨噬细胞所分泌的外泌体;将10μg·mL-1的上述外泌体以及等体积的磷酸盐缓冲液与MDA-MB-231共孵育48 h(M0 exo组、M1 exo组、M2 exo组、miR-92b exo组、Negative Control exo组、PBS组),MDA-MB-231细胞转染miR-92b mimic、Negative Control(miR-92b组、Negative Control组),MDA-MB-231细胞与10μg·mL-1 miR-92b exo共孵育的同时转染磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)质粒(miR-92b exo+PTEN组),透射电镜观察上述细胞中的自噬小体,蛋白质印迹法检测上述细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62的表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-92b和PTEN的靶向关系。结果 PBS组、M0 exo组、M1 exo组、M2 exo组、Negative Control组、miR-92b组、miR-92b exo组和miR-92b exo+PTEN组MDA-MB-231细胞自噬小体数分别为(7.00±1.00),(7.33±2.08),(2.00±1.00),(12.67±1.53),(4.00±1.00),(12.67±2.52),(4.00±1.00)和(13.33±1.53)个;这8组MDA-MB-231细胞LC3-Ⅱ相对蛋白表达水平分别为0.94±0.02,0.95±0.02,0.06±0.01,1.30±0.06,0.48±0.06,1.83±0.04,0.27±0.03和1.13±0.05;这8组MDA-MB-231细胞p62相对蛋白表达水平分别为1.08±0.03,1.10±0.06,2.15±0.09,0.27±0.03,1.56±0.07,0.30±0.04,0.17±0.02和1.78±0.14。上述指标,M1 exo组和M2 exo组与PBS组相比,Negative Control组与miR-92b组相比,miR-92b exo组与miR-92b exo+PTEN组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 外泌体miR-92b可通过抑制PTEN的表达而促进乳腺癌细胞的自噬。
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