【摘 要】
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目的观察他克莫司(Tacrolimus，FK506)及嘌呤霉素(Puromycin，PAN)对小鼠肾小球足细胞podocin蛋白表达和分布的影响，探讨FK506保护肾小球足细胞、影响蛋白尿产生的机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5)，实验分为对照组、PAN组和FK506组。处理8 h、24 h和48 h后，观察并收集细胞进行实时荧光定量PCR、Western blot检测podocin m
【机 构】
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目的观察他克莫司(Tacrolimus，FK506)及嘌呤霉素(Puromycin，PAN)对小鼠肾小球足细胞podocin蛋白表达和分布的影响，探讨FK506保护肾小球足细胞、影响蛋白尿产生的机制。
方法体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5)，实验分为对照组、PAN组和FK506组。处理8 h、24 h和48 h后，观察并收集细胞进行实时荧光定量PCR、Western blot检测podocin mRNA及蛋白的表达，免疫荧光染色检测podocin蛋白的分布。
结果PAN组在8 h、24 h、48 h时胞体面积(6.41±0.22、4.96±0.09、3.76±0.16)较对照组(8.54±0.25、8.27±0.07、7.45±0.13)缩小。FK506组各时间点足细胞胞体面积(7.67±0.06、6.62±0.04、5.57±0.27)较PAN组增大。PAN组在8 h、24 h、48 h荧光定量PCR(0.63±0.12、0.56±0.01、0.48±0.02)、Western blot(0.71±0.03、0.46±0.01、0.34±0.02)及免疫荧光染色结果显示podocin mRNA表达量(1.22±0.15、1.18±0.06、0.87±0.30)较对照组下降，蛋白表达量(0.86±0.03、0.87±0.03、0.61±0.07)降低且分布异常，随着时间的延长mRNA和蛋白表达量明显降低(均P<0.05)，分布明显异常。FK506组在8 h、24 h、48 h时podocin mRNA(0.87±0.15、0.78±0.15、0.58±0.12)及蛋白(0.82±0.02、0.62±0.03、0.50±0.02)的表达量较PAN组逐渐升高，分布趋于正常(P<0.05)。
结论在PAN损伤足细胞的经典模型中，podocin mRNA及蛋白表达降低，FK506通过稳定podocin mRNA和蛋白的表达及分布来保护PAN诱导损伤的足细胞，该作用可能与FK506抑制蛋白尿产生及改善机制有关，可作为研究及治疗肾脏疾病的靶点。
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