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454焦磷酸测序已成为真菌群落结构研究的常用手段，文中对454焦磷酸测序的Bareoded PCR扩增中的模板质量浓度、Mg2＋和引物浓度等反应条件进行了优化，并对扩增所得产物的特异性进行了鉴定；同时就不同Taq酶对测序结果的影响进行了讨论。结果表明：DNA模板经适度稀释能显著提高反应效率；Mg2＋及引物浓度对扩增反应效率有影响，建议上下游引物浓度均为0．1μmol·L-1，Mg2＋浓度可不做调整；使用特异性好、活性较强的细酶对保证扩增产物的真菌特异性至关重要，建议选用热启动Taq酶。