【摘 要】
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目的构建含B7-1基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,并转染LM8骨肉瘤细胞,研究获得其在LM8细胞中高效稳定表达的方法.方法用RT-PCR法扩增B7-1基因片断,应用含GFP基因
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,430022;
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目的构建含B7-1基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,并转染LM8骨肉瘤细胞,研究获得其在LM8细胞中高效稳定表达的方法.方法用RT-PCR法扩增B7-1基因片断,应用含GFP基因的真核表达质粒构建融合表达载体,酶切、测序鉴定构建质粒;采用脂质体介导方法将其转染到LM8细胞,并用荧光显微镜及Weste blot检测其在肿瘤疫苗细胞中的表达.结果经PCR及酶切鉴定,证实成功构建了含B7-1基因的真核表达重组体pEGFP-C1/B7,重组子测序结果与Genebank中mB7-1序列相符.用荧光显微镜观察到转染骨肉瘤细胞中有GFP表达,RT-PCR检测到转染骨肉瘤细胞中B7-1基因的表达,Weste blot发现转染骨肉瘤细胞中有B7蛋白的表达.结论B7-1重组真核绿色荧光表达载体pEGFP-C1/B7已成功构建,并成功转染LM8细胞.
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