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【目的】构建铁皮石斛互补脱氧核糖核酸（cDNA）表达文库，为克隆石斛活性成分生物合成相关功能基因的全长奠定基础。【方法】以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛中提取总RNA。分离纯化mRNA，LD-PCR（long distance polymerase chain reaction）法反转录合成双链cDNA，以λTripIEX2为载体，构建铁皮石斛cDNA文库，文库滴度以每mL含噬菌斑形成单位（pfu）的数目来表示，PCR扩增鉴定插入片段。【结果】成功地构建了铁皮石斛cDNA表达文库，原始文库的噬菌斑滴