【摘 要】
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用EDC法将BSA和OVA分别和环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)偶联作为免疫原和包被原,并经紫外扫描(UV Scan)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定.用合成的BSA-CIP免疫BALB/c小鼠,
【机 构】
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河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室,河南花花牛乳业股份有限公司
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用EDC法将BSA和OVA分别和环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)偶联作为免疫原和包被原,并经紫外扫描(UV Scan)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定.用合成的BSA-CIP免疫BALB/c小鼠,经过3次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌CIP单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备CIP mAb,对CIPmAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定.聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明BSA-CIP人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-4;其中2号小鼠血清CIP抑制效价较高且IC50最低,达48.59μg/L,融合后筛选出Z3G12B3和Z2H8C10两株敏感特异的杂交瘤细胞,其两株细胞培养上清液效价为1:512,腹水效价为1:2.56×105,Z3G12B3株对CIP的IC50为2.47μg/L,与二氟沙星、沙拉沙星有小于0.03%的交叉反应性.与其他抑制物无交叉反应性.该试验获得了高效价、敏感、特异的抗CIP mAb,为CIP残留ELISA检测试剂盒和试纸条的建立奠定了坚实的基础.
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