【摘 要】
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目的探讨MBP-1(c-myc promter binding protein 1,MBP-1)基因表达沉默对胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖影响。方法实验分3组:空白对照组(未转染胃癌细胞)、阴性对照组(转染错义
【机 构】
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兰州大学基础医学院生物化学及分子生物学研究所
【基金项目】
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兰州大学“中央高校基本科研业务费专项资金”自由探索项目(lzujbky-2012-187)
论文部分内容阅读
目的探讨MBP-1(c-myc promter binding protein 1,MBP-1)基因表达沉默对胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖影响。方法实验分3组:空白对照组(未转染胃癌细胞)、阴性对照组(转染错义序列)和干扰组(转染MBP-1shRNA)。设计2条针对MBP-1基因的小干扰RNA片段及1条阴性对照siRNA,并构建入pSIREN-retroQ质粒。将构建的重组pSIREN-retroQ质粒通过Lipofectamine 2000脂质体转染胃癌SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳转株细胞。Real time PCR和Western blot分别检测MBP-1表达。MTT法对MBP-1干扰后SGC-7901细胞增殖进行检测。结果通过PCR扩增阳性克隆及测序,说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组pSIREN-retroQ质粒。通过Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染胃癌SGC-7901细胞,并通过嘌呤霉素筛选2周,说明已成功构建MBP-1干扰及对照SGC-7901稳转株细胞。Real time PCR检测,干扰组MBP-1mRNA相对表达量与空白对照组相比显著下调(P<0.05)。Western blot检测MBP-1蛋白表达,干扰组MBP-1表达量与空白对照组相比也都显著下调。MTT法检测结果表明,MBP-1干扰组细胞在48、72、96和120h增殖能力比空白对照组都有显著的升高(P<0.05)。结论下调MBP-1基因表达能明显促进胃癌细胞SGC-7901的增殖,从而为胃癌基因治疗提供了新靶点。
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