【摘 要】
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目的:建立和优化基于钙黄绿素-AM(Calcein-AM)荧光扫描的细胞毒测定方法。方法:首先使用Calcein-AM染色靶细胞,扫描检测Calcein-AM荧光值,确定Calcein-AM最佳激发波长和发射
【机 构】
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广东药学院生命科学与生物制药学院/广东省生物技术候选药物研究重点实验室
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目的:建立和优化基于钙黄绿素-AM(Calcein-AM)荧光扫描的细胞毒测定方法。方法:首先使用Calcein-AM染色靶细胞,扫描检测Calcein-AM荧光值,确定Calcein-AM最佳激发波长和发射波长;然后优化Calcein-AM染色的浓度和时间;最后以效靶比为30∶1~1∶1,共孵育时间为4 h,荧光扫描测定靶细胞裂解的百分率。结果:荧光染料Calcein-AM能有效标记靶细胞,最佳激发波长和发射波长为485 nm和515 nm;Calcein-AM对细胞毒性低,不影响细胞活性;4 h内的自发释放率低于15%;CIK(Cytokine induced killer)效应细胞与靶细胞共孵育4 h的细胞毒效应随效靶比增加而升高。结论:建立和优化了Calcein-AM荧光染料标记靶细胞检测细胞毒效应的方法,该方法可避免放射性试剂的应用,对细胞毒性低,准确性高。
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