【摘 要】
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为了利用携带人源端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)基因的慢病毒表达系统将原代绵羊肺成纤维细胞进行永生化。本研究利用PCR技术从p Babe-neo
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2016YFD0500108);国家自然科学基金项目(31502068);上海市科技兴农重点攻关项目(2016043);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2016JB01;2017JB06)
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为了利用携带人源端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)基因的慢病毒表达系统将原代绵羊肺成纤维细胞进行永生化。本研究利用PCR技术从p Babe-neo-h TERT中扩增h TERT基因,并利用infusion技术构建重组慢病毒表达载体p LOV-puro-h TERT。将重组慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,拯救出慢病毒颗粒并感染原代绵羊肺成纤维细胞,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,分别应用RT-PCR和Western blot方法检测传代细胞系中h TERT基因的转录和表达水平。筛选获得的阳性克隆,命名为SLT细胞系。SLT细胞系连续传代后RT-PCR及Western blot检测均显示h TERT稳定表达。本研究表明,我们成功构建了永生化绵羊肺成纤维细胞系。
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