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摘要：目的 研究外用制剂朱红膏对大鼠的急性毒性和对豚鼠的皮肤刺激性，为临床安全用药提供依据。方法 急性毒性实验：建立朱红膏外用大鼠模型，制备破损皮肤，选取相当于临床用药剂量320倍的朱红膏（原药材609.28 mg/kg）进行实验，记录毒性反应和体质量增加情况。皮肤刺激性实验：建立朱红膏外用豚鼠模型，制备破损皮肤，采用同体左右侧自身对照法进行单次和多次给药的皮肤刺激性实验。结果 急性毒性实验中，未见大鼠出现急性毒性反应，给药组大鼠体质量和对照组比较，差异无统计学意义。皮肤刺激性实验中，未见豚鼠给药处皮肤出现红斑、水肿等情况。结论 一定时间内外用一定剂量的朱红膏对大鼠没有出现急性毒性反应，对豚鼠破损皮肤没有产生刺激性。
关键词：朱红膏；急性毒性；皮肤刺激性；大鼠；豚鼠
中图分类号：R285.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）09-0050-02
朱红膏是首都医科大学附属北京中医医院院内制剂，临床用于治疗慢性皮肤溃疡。其主要成分为朱砂和红粉，研究显示其中汞含量为16.72%[1]。临床使用时，将朱砂、红粉和凡士林以一定比例调和成膏剂，均匀涂抹于纱条上，纱条含药膏量为9 mg/cm2。前期动物实验表明，大剂量长时间给药会对大鼠肾脏产生损害，而短期小剂量给药是安全的[2-4]。为了避免临床用药时不良反应的发生，本研究对动物模型进行了急性毒性和皮肤刺激性实验[5-7]。
1 实验材料
1.1 药物
朱红膏（朱砂、红粉、凡士林）、朱红粉（朱砂、红粉）、凡士林均为首都医科大学附属北京中医医院中心制剂室提供。
1.2 动物
SD大鼠，体质量200 g，SPF级，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2006-2009。白色豚鼠，体质量200 g，雄性，购自北京沙河通利试验动物养殖场，许可证号SCXK（京）2010-0004。饲养于SPF动物房内，温度（22±2）℃，相对湿度40%～60%，12 h光照。
2 实验方法
2.1 急性毒性实验
SD大鼠30只，雌雄各半，空白对照组雌、雄各5只，朱红膏给药组（原药材609.28 mg/kg）雌、雄各10只。于给药前24 h，将大鼠背部脊柱两侧毛用10%硫化钠脱净，脱毛面积30 cm2（为体表面积的10%）。实验时，先用单面刀片刮伤大鼠背部脱毛区，力度均等，以渗血为度，再将0.5 g朱红膏均匀涂抹在给药组大鼠背部，并用纱布和橡皮膏固定。给药24 h后，用植物油洗去残留受试物。去除受试物后14 d内，观察并记录大鼠皮肤、毛发、饮食、大小便和黏膜的异常情况，隔3 d称1次体质量。若有动物死亡，则需要肉眼观察和尸检。当有肉眼可见的病变时，需要进行病理组织学检查。
2.2 皮肤刺激性实验
2.2.1 单次给药皮肤刺激性实验 将朱红膏均匀涂抹于医用纱布上，制备成朱红膏纱条。24只豚鼠随机分为朱红膏高、低剂量组（原药材38.08、19.04 mg/kg），每组12只。采用同体左右侧自身对照法。于给药前24 h，将豚鼠背部脊柱两侧毛用10%硫化钠脱净，脱毛面积左右各20 cm2（为体表面积的10%）。实验时，用注射针头在脊柱两侧背部各划一“#”字，渗血为度，再将朱红膏纱条贴敷在左侧“#”字处，右侧涂布蒸馏水作为对照，用纱布和橡皮膏固定。敷药4 h后去除药物，分别于1、24、48、72 h观察皮肤反应，记录给药处有无红斑和水肿等情况，按评分标准记分及强度标准判断刺激强度[6]。对出现中度及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束后，对给药局部进行组织病理学检查。
2.2.2 多次给药皮肤刺激性实验 选用动物、操作方法、评价方法同“2.2.1”，每隔3 d在脊柱两侧背部各划一“#”字，并给药。在每次去除药物后1、24、48、72 h，分别观察和记录红斑、水肿、色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况，及其发生时间和消退时间，并对红斑和水肿进行评分，连续14 d。
3 统计学方法
使用SPSS17.0软件系统进行统计，数据用—x±s表示，组间均数比较采用独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
4 结果
4.1 朱红膏对大鼠的急性毒性
在整个观察期间，所有动物正常生长，毛色、行为活动、饮水、饮食及大小便均正常，口、鼻、耳等处无异常分泌物，所有动物均存活，虽然给药组动物体质量普遍低于空白对照组，但差异无统计学意义，提示一定剂量的朱红膏外用对大鼠无明显的急性毒性反应。结果见表1。
4.2 朱红膏对豚鼠的皮肤刺激性
朱红膏高、低剂量组单次、多次给药后动物表现为蜷卧少动，可能是因为皮肤刮伤和绑缚橡皮膏导致；敷药部位皮肤未见红斑、水肿，所有观察时间点刺激强度评分值均为0；有部分动物破损皮肤处形成少量结痂，1周内结痂逐渐脱落，恢复正常，考虑是针头划伤皮肤所致。实验期间共有9只动物死亡，尸检显示为胸腔积水、积血或肠胀气，且死亡数量和给药时间、给药剂量之间没有相关性，考虑是实验操作原因引起。
5 讨论
朱红膏具有提脓祛腐、敛疮生肌的功效，临床常用的贴敷面积为6 cm2，剂量为原药材0.34 mg/kg[2]。根据人和动物体表面积折算等效剂量，急性毒性实验所选取的剂量相当于临床剂量的320倍，皮肤刺激性实验朱红膏高、低剂量分别相当于临床剂量的20、10倍。
朱红膏的主要成分是朱砂、红粉和凡士林。其中朱砂的主要成分是HgS，占98.0%[8]，因其是共价化合物，溶解度很小，所以在汞的化合物中，朱砂的急性毒性比较小，合理用药不会对人体产生急性毒性损害[9]。红粉的主要成分是HgO，占99%[10]。目前关于红粉的毒性研究比较少，多是对其丹药的研究。凡士林是一种矿物蜡，不被皮肤吸收，且能在肌肤表面形成一道保护膜，使皮肤的水分不易蒸发散失，而且它极不溶于水，可长久附着在皮肤上，具有良好的保湿效果，使伤口部位的皮肤组织保持最佳状态，加速了皮肤自身的修复能力。凡士林虽然没有杀菌能力，但是它能阻挡来自空气中的细菌和皮肤接触，从而降低感染的可能性。目前为止，未发现对以凡士林为基质的含汞药物毒性研究的报道[11]。
急性毒性实验显示，一次性给予破损皮肤模型大鼠大剂量的朱红膏没有产生急性毒性。选取比人皮肤敏感的豚鼠进行皮肤刺激性实验，结果显示朱红膏对豚鼠破损皮肤没有明显的刺激性。
参考文献：
[1] 毛克臣，李卫敏，李洋，等.朱红膏的质量控制[J].中国中医药信息杂志， 2003，10（4）：44-45.
[2] 董建勋，王乐平，李建荣，等.朱红膏毒性靶器官及安全用药范围研究[J].中华中医药杂志，2011，26（6）：1293-1295.
[3] 董建勋，罗玲，李建荣，等.朱红膏促进皮肤溃疡愈合的安全性研究[J].中国中医药信息杂志，2011，18（6）：47-49.
[4] 王乐平，董建勋，罗玲，等.外用制剂朱红膏肾脏早期毒性敏感指标NAG、RBP的监测[J].中华中医药杂志，2011，26（10）：2261.
[5] 吕秋军.新药药理学研究方法[M].北京：化学工业出版社，2007：379，426-428.
[6] 孙敬方.动物实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2001：118.
[7] 陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2006：159-161.
[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：128，143.
[9] Liu J， Liao P， Yu L， et al. Mercury of traditional medicines：is cinnabar toxicologically similar to common mercurial[J]. Experimental Biology and Medicine，2008，23（3）：810.
[10] 刘忠恕，方金福，李竞.红升丹的毒性实验研究[J].天津中医，1986（4）：24-25.
[11] 吕培文，张苍，宋孝瑜，等.朱红膏治疗慢性溃疡的临床研究[J].中国中西医结合外科杂志，2003，9（5）：364-366.
（收稿日期：2012-06-25，编辑：华强）
关键词：朱红膏；急性毒性；皮肤刺激性；大鼠；豚鼠
中图分类号：R285.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）09-0050-02
朱红膏是首都医科大学附属北京中医医院院内制剂，临床用于治疗慢性皮肤溃疡。其主要成分为朱砂和红粉，研究显示其中汞含量为16.72%[1]。临床使用时，将朱砂、红粉和凡士林以一定比例调和成膏剂，均匀涂抹于纱条上，纱条含药膏量为9 mg/cm2。前期动物实验表明，大剂量长时间给药会对大鼠肾脏产生损害，而短期小剂量给药是安全的[2-4]。为了避免临床用药时不良反应的发生，本研究对动物模型进行了急性毒性和皮肤刺激性实验[5-7]。
1 实验材料
1.1 药物
朱红膏（朱砂、红粉、凡士林）、朱红粉（朱砂、红粉）、凡士林均为首都医科大学附属北京中医医院中心制剂室提供。
1.2 动物
SD大鼠，体质量200 g，SPF级，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2006-2009。白色豚鼠，体质量200 g，雄性，购自北京沙河通利试验动物养殖场，许可证号SCXK（京）2010-0004。饲养于SPF动物房内，温度（22±2）℃，相对湿度40%～60%，12 h光照。
2 实验方法
2.1 急性毒性实验
SD大鼠30只，雌雄各半，空白对照组雌、雄各5只，朱红膏给药组（原药材609.28 mg/kg）雌、雄各10只。于给药前24 h，将大鼠背部脊柱两侧毛用10%硫化钠脱净，脱毛面积30 cm2（为体表面积的10%）。实验时，先用单面刀片刮伤大鼠背部脱毛区，力度均等，以渗血为度，再将0.5 g朱红膏均匀涂抹在给药组大鼠背部，并用纱布和橡皮膏固定。给药24 h后，用植物油洗去残留受试物。去除受试物后14 d内，观察并记录大鼠皮肤、毛发、饮食、大小便和黏膜的异常情况，隔3 d称1次体质量。若有动物死亡，则需要肉眼观察和尸检。当有肉眼可见的病变时，需要进行病理组织学检查。
2.2 皮肤刺激性实验
2.2.1 单次给药皮肤刺激性实验 将朱红膏均匀涂抹于医用纱布上，制备成朱红膏纱条。24只豚鼠随机分为朱红膏高、低剂量组（原药材38.08、19.04 mg/kg），每组12只。采用同体左右侧自身对照法。于给药前24 h，将豚鼠背部脊柱两侧毛用10%硫化钠脱净，脱毛面积左右各20 cm2（为体表面积的10%）。实验时，用注射针头在脊柱两侧背部各划一“#”字，渗血为度，再将朱红膏纱条贴敷在左侧“#”字处，右侧涂布蒸馏水作为对照，用纱布和橡皮膏固定。敷药4 h后去除药物，分别于1、24、48、72 h观察皮肤反应，记录给药处有无红斑和水肿等情况，按评分标准记分及强度标准判断刺激强度[6]。对出现中度及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束后，对给药局部进行组织病理学检查。
2.2.2 多次给药皮肤刺激性实验 选用动物、操作方法、评价方法同“2.2.1”，每隔3 d在脊柱两侧背部各划一“#”字，并给药。在每次去除药物后1、24、48、72 h，分别观察和记录红斑、水肿、色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况，及其发生时间和消退时间，并对红斑和水肿进行评分，连续14 d。
3 统计学方法
使用SPSS17.0软件系统进行统计，数据用—x±s表示，组间均数比较采用独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
4 结果
4.1 朱红膏对大鼠的急性毒性
在整个观察期间，所有动物正常生长，毛色、行为活动、饮水、饮食及大小便均正常，口、鼻、耳等处无异常分泌物，所有动物均存活，虽然给药组动物体质量普遍低于空白对照组，但差异无统计学意义，提示一定剂量的朱红膏外用对大鼠无明显的急性毒性反应。结果见表1。
4.2 朱红膏对豚鼠的皮肤刺激性
朱红膏高、低剂量组单次、多次给药后动物表现为蜷卧少动，可能是因为皮肤刮伤和绑缚橡皮膏导致；敷药部位皮肤未见红斑、水肿，所有观察时间点刺激强度评分值均为0；有部分动物破损皮肤处形成少量结痂，1周内结痂逐渐脱落，恢复正常，考虑是针头划伤皮肤所致。实验期间共有9只动物死亡，尸检显示为胸腔积水、积血或肠胀气，且死亡数量和给药时间、给药剂量之间没有相关性，考虑是实验操作原因引起。
5 讨论
朱红膏具有提脓祛腐、敛疮生肌的功效，临床常用的贴敷面积为6 cm2，剂量为原药材0.34 mg/kg[2]。根据人和动物体表面积折算等效剂量，急性毒性实验所选取的剂量相当于临床剂量的320倍，皮肤刺激性实验朱红膏高、低剂量分别相当于临床剂量的20、10倍。
朱红膏的主要成分是朱砂、红粉和凡士林。其中朱砂的主要成分是HgS，占98.0%[8]，因其是共价化合物，溶解度很小，所以在汞的化合物中，朱砂的急性毒性比较小，合理用药不会对人体产生急性毒性损害[9]。红粉的主要成分是HgO，占99%[10]。目前关于红粉的毒性研究比较少，多是对其丹药的研究。凡士林是一种矿物蜡，不被皮肤吸收，且能在肌肤表面形成一道保护膜，使皮肤的水分不易蒸发散失，而且它极不溶于水，可长久附着在皮肤上，具有良好的保湿效果，使伤口部位的皮肤组织保持最佳状态，加速了皮肤自身的修复能力。凡士林虽然没有杀菌能力，但是它能阻挡来自空气中的细菌和皮肤接触，从而降低感染的可能性。目前为止，未发现对以凡士林为基质的含汞药物毒性研究的报道[11]。
急性毒性实验显示，一次性给予破损皮肤模型大鼠大剂量的朱红膏没有产生急性毒性。选取比人皮肤敏感的豚鼠进行皮肤刺激性实验，结果显示朱红膏对豚鼠破损皮肤没有明显的刺激性。
参考文献：
[1] 毛克臣，李卫敏，李洋，等.朱红膏的质量控制[J].中国中医药信息杂志， 2003，10（4）：44-45.
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[3] 董建勋，罗玲，李建荣，等.朱红膏促进皮肤溃疡愈合的安全性研究[J].中国中医药信息杂志，2011，18（6）：47-49.
[4] 王乐平，董建勋，罗玲，等.外用制剂朱红膏肾脏早期毒性敏感指标NAG、RBP的监测[J].中华中医药杂志，2011，26（10）：2261.
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[7] 陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2006：159-161.
[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：128，143.
[9] Liu J， Liao P， Yu L， et al. Mercury of traditional medicines：is cinnabar toxicologically similar to common mercurial[J]. Experimental Biology and Medicine，2008，23（3）：810.
[10] 刘忠恕，方金福，李竞.红升丹的毒性实验研究[J].天津中医，1986（4）：24-25.
[11] 吕培文，张苍，宋孝瑜，等.朱红膏治疗慢性溃疡的临床研究[J].中国中西医结合外科杂志，2003，9（5）：364-366.
（收稿日期：2012-06-25，编辑：华强）