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【摘要】 目的：分析宫颈癌患者治疗前后及复发后血浆骨桥蛋白（OPN）的变化，评价OPN在预测宫颈癌复发中的作用。方法：应用酶联免疫吸附（ELISA）法测定238例宫颈癌患者治疗前后及随访5年的血浆OPN水平，统计分析血浆OPN水平和临床指标及复发的关系。结果：在Ⅰb～Ⅱa期宫颈癌患者中，OPN表达水平与分化程度、转移程度有关（P<0.05），与年龄、临床期别、细胞类型无关（P>0.05）。且随着治疗，血浆OPN表达水平明显降低（P<0.05）。当宫颈癌复发时血浆OPN表达水平明显高于未复发者（P<0.05）。结论：血浆OPN表达水平与宫颈癌的发展和复发密切相关，有望成为宫颈癌的一个复发预测指标。
【关键词】 宫颈癌； 血浆； 骨桥蛋白； 复发
【Abstract】 Objective：To investigate the change of plasma osteopontin （OPN） level before and after treatment in cervical cancer patients and in cervical cancer recurrence.Method：The plasma OPN levels of 238 cervical cancer patients before and after treatment were measured by ELISA and followed for up to 5 years. The relations of between plasma OPN level and clinical variables， recurrence were analyzed.Result：Plasma OPN levels was associated with differentiation degree and metastasis in patients with stage Ⅰb-Ⅱa cervical cancer（P<0.05）and not associated with age， clinical stage and pathological type（P>0.05）. Plasma OPN expression level decreased obviously after treatment（P<0.05）. When cervical cancer recurrence plasma OPN level was significantly higher than without recurrence（P<0.05）. Conclusion：The evaluation of plasma level of OPN may be helpful to predict the recurrence of cervical cancer patients in advance.
【Key words】 Cervical cancer； Plasma； Osteopontin； Recurrence
宫颈癌是威胁女性健康的最常见的恶性肿瘤之一。虽然宫颈刮片和液基细胞检查的普及使得宫颈癌的早期诊断和治疗效果较前明显提高，但仍有许多患者死于转移和复发。宫颈癌治疗后，约有31%出现肿瘤复发，75%发生于治疗后2年内，且复发后治疗十分困难，预后极差，平均存活期为7个月[1]。目前对于宫颈癌复发尚缺乏监测的体液学指标。骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种分泌型磷酸化糖蛋白，近年来被发现参与人类多种肿瘤如乳腺癌、大肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、头颈部鳞状细胞癌等的恶性转化、生长、浸润和转移[2-4]。本研究通过监测血浆OPN水平在宫颈癌治疗过程中的变化，以期望找到一种简便、重复性好、准确、经济的监测指标来指示宫颈癌的复发。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2007年3月-2014年5月在本院住院治疗的238例宫颈癌患者作为研究对象，患者年龄21～74岁，平均（46.2±19.5）岁。所有患者住院前未接受任何肿瘤治疗，且经过病理学证实均为宫颈癌Ⅰb～Ⅱa期，其中Ⅰb期156例，Ⅱa期82例；鳞癌179例，腺癌59例；高分化61例，中分化98例，低分化79例；根据术后病理分为有淋巴结或脉管转移105例，无转移133例。
1.2 临床资料 所有患者根据病情进行规范化治疗，包括手术、放疗、化疗。随访期间定期复查阴道残端液基细胞检查、腹部B超，必要时行CT检查、病灶活检。
1.3 标本收集 分别取患者治疗前、完全治疗结束后1个月及复发时或未复发者随访5年结束时外周静脉血（均未输液时），以EDTA抗凝，4 ℃ 2000 r/min，离心15 min，取血浆冻存于-70 ℃备用。
1.4 检测方法 采用OPN ELISA试剂盒（CALBIOCHEM 公司生产），检测操作严格按试剂盒要求进行，全部标本统一检测，每例标本共检测3次取加权平均值。检测者和收集临床标本及随访资料者实行双盲控制。
1.5 统计学处理 运用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 OPN表达水平和临床病理参数的关系 对血浆OPN表达水平和一些常见临床病理参数之间的关系进行分析，这些参数包括年龄、期别、细胞类型、分化程度、转移程度，发现OPN表达水平与分化程度、转移程度有关（P<0.05），与年龄、临床期别、细胞类型无关（P>0.05），见表1。
2.2 治疗前后血浆OPN水平的变化 治疗前患者的血浆OPN水平为（184.76±50.27）ng/mL，完整规范治疗后为（126.97±56.14）ng/mL，治疗前OPN表达水平明显高于治疗后，差异有统计学意义（P=0.012）。 2.3 OPN表达水平和治疗后复发的关系 随访5年，其中6例死于非宫颈癌相关原因，14例失访，随访率为91.6%。在完整随访5年的218例患者中，34例（15.60%）复发，其中2例（0.9%）死于肿瘤复发转移。其中复发患者的血浆OPN水平为（198.02±27.81）ng/mL明显高于未复发患者的（117.50±60.39）ng/mL，两者比较差异有统计学意义（P=0.007）。
3 讨论
OPN是一种分子量为66KD的分泌型糖基鳞蛋白，表达于骨组织和上皮细胞中，并且在很多肿瘤中表达增加。有研究表明OPN参与肿瘤发生发展的机制主要包括促进肿瘤血管生成；参与免疫应答；参与肿瘤趋化、黏附和迁移；抑制肿瘤细胞凋亡等[5-6]。在人类多种肿瘤如乳腺癌、大肠癌等的恶性转化、浸润与转移中，OPN能够反映出肿瘤恶性程度、促进肿瘤转移和提高肿瘤细胞侵袭能力[6-9]。但OPN与宫颈癌关系的研究相对较少。
在宫颈癌治疗后随访中，组织学与影像学检查是目前主要的监测指标。与之相比，血液学指标由于操作简便、无创伤、可重复性强、利于治疗后随访等众多优点而具有更为诱人的应用前景。有研究证实，外周血OPN表达水平可以用于乳腺癌、头颈部鳞癌和卵巢癌的预后评价，但目前尚无有关外周血OPN表达水平和宫颈癌预后及复发关系的报道[10-11]。
在本研究中，OPN表达水平在分化程度、转移程度不同组间有明显差异性，说明OPN的升高预示着宫颈癌较高的恶性程度、局部转移，这与既往OPN在宫颈癌组织学中表达的研究结果相一致[12-13]。但与临床期别无关，可能与本研究纳入临床期别较少有关。本研究还发现，治疗后外周血中OPN水平明显下降，提示着OPN可作为一种疗效的评价指标，这与王君霞等[14]的研究结论是一致的。在随访过程中，笔者通过对经过组织学或影像学证实复发的患者的检测，其外周血中OPN的水平明显高于未复发患者，进一步证实了OPN参与宫颈癌的发展和转移。但能否优先于组织学或影像学检查，作为判断宫颈癌复发的独立诊断学指标目前还不成立，尚需要大量的临床研究。
综上所述，OPN在宫颈癌发展、转移、侵袭中可能具有重要的作用，可通过检测血清学中OPN的表达水平评估患者临床疗效，且可能作为一个新的标志物用于宫颈癌的预后判断和复发预测。
参考文献
[1]吕卫国，谢幸.复发转移宫颈癌的治疗[J].中国实用妇科与产科杂志，2004，20（7）：393-394.
[2] Rudland P S， Platt-Higgins A， EI-Tanani M， et al. Prognostic significance of the metastasis-associated protein osteopontin in human breast cancer[J]. Cancer Res，2002，62（12）：3417-3427.
[3] Denhardt D T.Identification of osteopontin as a prognostic marker for head and neck squamous cell carcinomas[J]. Clin Cancer Res，2003，9（1）：31-32.
[4] Hotte S J， Winquist E W， Stitt L， et al. Plasma osteopontin： associations with survival and metastasis to bone in men with hormone refraetory prostate carcinoma[J]. Cancer，2002，95（3）： 506-512.
[5] Song J Y， Lee J K， Lee N W， et al. Osteopontin expression correlates with invasiveness in cervical cancer[J]. Aust NZJ Obstet Gynaecol，2009，49（4）：434-438.
[6] Likui W， Hong W， Shuwen Z. Clinical significance of the upregulated osteopontin mRNA expression in human colorectal cancer[J]. J Gastrointest Surg，2010，14（1）：74-81.
[7] Huang J， Pan C， Hu H， et al. Osteopontin-enhanced hepatic metastasis of colorectal cancer cells[J].PLoS One，2012，7（10）：e47 901.
[8] Mi Z， Bhattacharya S D， Kim V M， et al. Osteopontin promotes CCL5-mesenchymal stromal cell-mediated breast cancer metastasis[J]. Carcinogenesis，2011，32（4）：477-487.
[9] Briese J， Cheng S， Ezzat S， et al. Osteopontin （OPN） expression in thyroid carcinoma[J]. Anticancer Res，2010，30（5）：1681-1688.
[10] Singhal H， Bautista D S， Tonkin K S， et al. Elevated plasma osteopontin in metastatic breast cancer associated with increased tumor burden and decreased survival[J]. Clin Cancer Res，1997，3（4）：605-611.
[11] Le Q T， Sutphin P D， Raychaudhuri S， et al. Identification of osteopontin as a prognostic plasma marker for head and neck squamous cell carcinomas[J]. Clin Cancer Res，2003，9（1）：59-67.
[12] Sakaguehi H， Fujimoto J. Clinical implications of osteopontin in metastatic lesions of uterine cervical cancers[J]. Cancer Lett，2007，247（1）：98-102.
[13]李博，高志安，李辉.骨桥蛋白在宫颈癌组织中的表达及其相关因素[J].山东医药，2012，52（1）：48-49.
[14]王君霞，关婷.宫颈癌中骨桥蛋白的表达及与新辅助化疗敏感性关系的研究[J].发育医学电子杂志，2013，1（1）：16-22.
（收稿日期：2014-07-15） （本文编辑：蔡元元）
【关键词】 宫颈癌； 血浆； 骨桥蛋白； 复发
【Abstract】 Objective：To investigate the change of plasma osteopontin （OPN） level before and after treatment in cervical cancer patients and in cervical cancer recurrence.Method：The plasma OPN levels of 238 cervical cancer patients before and after treatment were measured by ELISA and followed for up to 5 years. The relations of between plasma OPN level and clinical variables， recurrence were analyzed.Result：Plasma OPN levels was associated with differentiation degree and metastasis in patients with stage Ⅰb-Ⅱa cervical cancer（P<0.05）and not associated with age， clinical stage and pathological type（P>0.05）. Plasma OPN expression level decreased obviously after treatment（P<0.05）. When cervical cancer recurrence plasma OPN level was significantly higher than without recurrence（P<0.05）. Conclusion：The evaluation of plasma level of OPN may be helpful to predict the recurrence of cervical cancer patients in advance.
【Key words】 Cervical cancer； Plasma； Osteopontin； Recurrence
宫颈癌是威胁女性健康的最常见的恶性肿瘤之一。虽然宫颈刮片和液基细胞检查的普及使得宫颈癌的早期诊断和治疗效果较前明显提高，但仍有许多患者死于转移和复发。宫颈癌治疗后，约有31%出现肿瘤复发，75%发生于治疗后2年内，且复发后治疗十分困难，预后极差，平均存活期为7个月[1]。目前对于宫颈癌复发尚缺乏监测的体液学指标。骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种分泌型磷酸化糖蛋白，近年来被发现参与人类多种肿瘤如乳腺癌、大肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、头颈部鳞状细胞癌等的恶性转化、生长、浸润和转移[2-4]。本研究通过监测血浆OPN水平在宫颈癌治疗过程中的变化，以期望找到一种简便、重复性好、准确、经济的监测指标来指示宫颈癌的复发。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2007年3月-2014年5月在本院住院治疗的238例宫颈癌患者作为研究对象，患者年龄21～74岁，平均（46.2±19.5）岁。所有患者住院前未接受任何肿瘤治疗，且经过病理学证实均为宫颈癌Ⅰb～Ⅱa期，其中Ⅰb期156例，Ⅱa期82例；鳞癌179例，腺癌59例；高分化61例，中分化98例，低分化79例；根据术后病理分为有淋巴结或脉管转移105例，无转移133例。
1.2 临床资料 所有患者根据病情进行规范化治疗，包括手术、放疗、化疗。随访期间定期复查阴道残端液基细胞检查、腹部B超，必要时行CT检查、病灶活检。
1.3 标本收集 分别取患者治疗前、完全治疗结束后1个月及复发时或未复发者随访5年结束时外周静脉血（均未输液时），以EDTA抗凝，4 ℃ 2000 r/min，离心15 min，取血浆冻存于-70 ℃备用。
1.4 检测方法 采用OPN ELISA试剂盒（CALBIOCHEM 公司生产），检测操作严格按试剂盒要求进行，全部标本统一检测，每例标本共检测3次取加权平均值。检测者和收集临床标本及随访资料者实行双盲控制。
1.5 统计学处理 运用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 OPN表达水平和临床病理参数的关系 对血浆OPN表达水平和一些常见临床病理参数之间的关系进行分析，这些参数包括年龄、期别、细胞类型、分化程度、转移程度，发现OPN表达水平与分化程度、转移程度有关（P<0.05），与年龄、临床期别、细胞类型无关（P>0.05），见表1。
2.2 治疗前后血浆OPN水平的变化 治疗前患者的血浆OPN水平为（184.76±50.27）ng/mL，完整规范治疗后为（126.97±56.14）ng/mL，治疗前OPN表达水平明显高于治疗后，差异有统计学意义（P=0.012）。 2.3 OPN表达水平和治疗后复发的关系 随访5年，其中6例死于非宫颈癌相关原因，14例失访，随访率为91.6%。在完整随访5年的218例患者中，34例（15.60%）复发，其中2例（0.9%）死于肿瘤复发转移。其中复发患者的血浆OPN水平为（198.02±27.81）ng/mL明显高于未复发患者的（117.50±60.39）ng/mL，两者比较差异有统计学意义（P=0.007）。
3 讨论
OPN是一种分子量为66KD的分泌型糖基鳞蛋白，表达于骨组织和上皮细胞中，并且在很多肿瘤中表达增加。有研究表明OPN参与肿瘤发生发展的机制主要包括促进肿瘤血管生成；参与免疫应答；参与肿瘤趋化、黏附和迁移；抑制肿瘤细胞凋亡等[5-6]。在人类多种肿瘤如乳腺癌、大肠癌等的恶性转化、浸润与转移中，OPN能够反映出肿瘤恶性程度、促进肿瘤转移和提高肿瘤细胞侵袭能力[6-9]。但OPN与宫颈癌关系的研究相对较少。
在宫颈癌治疗后随访中，组织学与影像学检查是目前主要的监测指标。与之相比，血液学指标由于操作简便、无创伤、可重复性强、利于治疗后随访等众多优点而具有更为诱人的应用前景。有研究证实，外周血OPN表达水平可以用于乳腺癌、头颈部鳞癌和卵巢癌的预后评价，但目前尚无有关外周血OPN表达水平和宫颈癌预后及复发关系的报道[10-11]。
在本研究中，OPN表达水平在分化程度、转移程度不同组间有明显差异性，说明OPN的升高预示着宫颈癌较高的恶性程度、局部转移，这与既往OPN在宫颈癌组织学中表达的研究结果相一致[12-13]。但与临床期别无关，可能与本研究纳入临床期别较少有关。本研究还发现，治疗后外周血中OPN水平明显下降，提示着OPN可作为一种疗效的评价指标，这与王君霞等[14]的研究结论是一致的。在随访过程中，笔者通过对经过组织学或影像学证实复发的患者的检测，其外周血中OPN的水平明显高于未复发患者，进一步证实了OPN参与宫颈癌的发展和转移。但能否优先于组织学或影像学检查，作为判断宫颈癌复发的独立诊断学指标目前还不成立，尚需要大量的临床研究。
综上所述，OPN在宫颈癌发展、转移、侵袭中可能具有重要的作用，可通过检测血清学中OPN的表达水平评估患者临床疗效，且可能作为一个新的标志物用于宫颈癌的预后判断和复发预测。
参考文献
[1]吕卫国，谢幸.复发转移宫颈癌的治疗[J].中国实用妇科与产科杂志，2004，20（7）：393-394.
[2] Rudland P S， Platt-Higgins A， EI-Tanani M， et al. Prognostic significance of the metastasis-associated protein osteopontin in human breast cancer[J]. Cancer Res，2002，62（12）：3417-3427.
[3] Denhardt D T.Identification of osteopontin as a prognostic marker for head and neck squamous cell carcinomas[J]. Clin Cancer Res，2003，9（1）：31-32.
[4] Hotte S J， Winquist E W， Stitt L， et al. Plasma osteopontin： associations with survival and metastasis to bone in men with hormone refraetory prostate carcinoma[J]. Cancer，2002，95（3）： 506-512.
[5] Song J Y， Lee J K， Lee N W， et al. Osteopontin expression correlates with invasiveness in cervical cancer[J]. Aust NZJ Obstet Gynaecol，2009，49（4）：434-438.
[6] Likui W， Hong W， Shuwen Z. Clinical significance of the upregulated osteopontin mRNA expression in human colorectal cancer[J]. J Gastrointest Surg，2010，14（1）：74-81.
[7] Huang J， Pan C， Hu H， et al. Osteopontin-enhanced hepatic metastasis of colorectal cancer cells[J].PLoS One，2012，7（10）：e47 901.
[8] Mi Z， Bhattacharya S D， Kim V M， et al. Osteopontin promotes CCL5-mesenchymal stromal cell-mediated breast cancer metastasis[J]. Carcinogenesis，2011，32（4）：477-487.
[9] Briese J， Cheng S， Ezzat S， et al. Osteopontin （OPN） expression in thyroid carcinoma[J]. Anticancer Res，2010，30（5）：1681-1688.
[10] Singhal H， Bautista D S， Tonkin K S， et al. Elevated plasma osteopontin in metastatic breast cancer associated with increased tumor burden and decreased survival[J]. Clin Cancer Res，1997，3（4）：605-611.
[11] Le Q T， Sutphin P D， Raychaudhuri S， et al. Identification of osteopontin as a prognostic plasma marker for head and neck squamous cell carcinomas[J]. Clin Cancer Res，2003，9（1）：59-67.
[12] Sakaguehi H， Fujimoto J. Clinical implications of osteopontin in metastatic lesions of uterine cervical cancers[J]. Cancer Lett，2007，247（1）：98-102.
[13]李博，高志安，李辉.骨桥蛋白在宫颈癌组织中的表达及其相关因素[J].山东医药，2012，52（1）：48-49.
[14]王君霞，关婷.宫颈癌中骨桥蛋白的表达及与新辅助化疗敏感性关系的研究[J].发育医学电子杂志，2013，1（1）：16-22.
（收稿日期：2014-07-15） （本文编辑：蔡元元）