论文部分内容阅读
原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,死亡率高,在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃癌、食道癌而居第三位。临床上原发性肝癌一般测定甲胎蛋白(AFP)结合影像学检查进行诊断,但早期由于缺乏典型的临床症状,很难确认。近年来,a-L-岩藻糖苷酶(AFU)在原发性肝癌早期诊断中的作用正引起人们广泛关注[ 1]。我院自2005年开展AFU检测,在临床上得到了有效应用.现将AFU的检测和应用体会总结如下。
1 AFU的基本特性
AFU是一种溶酶体酸性水解酶,化学本质是一种糖蛋白。分类名为α-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶(EC3.2.1.51)。血清中AFU的分子量为270KD～390KD。基本生理功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷的分解代谢。广泛分布于人体内的各种组织、细胞及体液中,如肝、脑、肾、胰、胎盘组织;细胞培养液中的成纤维细胞、白细胞以及血清、尿液、唾液、泪液和垂体液中均含此酶。AFU在人体内呈多形性,有三型同工酶,即AFU1、AFU1-2、AFU2,是由1个位于第1号染色体短臂(1,P34)上基因位点的2个等位基因所表达,高活性的AFU1由基因FU1所表达,低活性的AFU2由基因FU2所决定,而AFU1-2则由FU1-FU2两个基因的杂合子所决定。以往AFU主要用于遗传性AFU缺乏引起的岩藻糖贮积病的诊断,并借此与其他遗传性粘多糖贮积病相鉴别。1980年Deugnier[ 2]首先发现肝癌患者血清AFU活性明显高于正常人,从而为诊断原发性肝癌提供了新的指标。
2 AFU的实验室检测。血清AFU测定主要有荧光法和比色法
2.1 荧光法。AFU可水解4-甲基伞形酮a-L-岩藻呲喃糖苷,释放出4-甲基伞形酮,用碱性缓冲液终止反应并使产物呈现荧光。在360nm激发波长和400nm发射波长下检测荧光强度。对照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求得酶活性。此法敏感性高,最低检出限0.06U/L。既适用于血清,也适用于活检组织、细胞、脑脊液和泪液等量小的生物样本,以及AFU活性低的标本。用等聚焦电泳分离AFU同工酶时,也多利用此荧光底物显示酶区带。
2.2 比色法。以4-硝基苯a-L-岩藻呲喃糖苷为底物,本法简便,设备要求不高,国内外广泛采用。经过多次改良后,目前的商品试剂盒有效减少了样品中其它物质对测定的干扰,增加了反应速度。尤其利用4-NP摩尔吸光度计算酶活性,取代传统的标准曲线,既减化了操作,又利于自动化分析。最新实验用氯化对硝基苯a-L-岩藻呲喃糖苷做AFU的底物,可以使酶反应的最适合条件和显色环境相一致,不仅大大提高了反应灵敏度和精密度,而且大大提高了反应的抗干扰性,基本解决了溶血、黄疸、脂血的基质效应问题,是目前AFU测定方法学的重大突破[ 3]。
3 AFU的临床应用及体会
3.1 正常组织糖苷酶的释放率变化很小(孕妇除外),从而使血清糖苷酶维持在一定范围内。血清AFU升高主要见于原发性肝癌,阳性率为81.2%,与AFP联合检测,可提高肝癌的诊断阳性率达93.1%。AFU活性高低与肝癌的大小和AFP浓度无明显相关。有些肝癌体积很小,但AFU活性明显升高,因此可作为原发性肝癌的早期诊断参考指标。肝癌术后观察血清AFU的水平,也可用于监测疗效。肺癌、乳腺癌、子宫癌以及肝硬化、糖尿病也可见升高。妊娠期间,AFU升高,分娩后血清AFU迅速下降。
3.2 原发性肝癌病人的AFU活性显著高于继发性肝癌、胆管细胞癌、恶性血管内皮细胞瘤、恶性间皮细胞瘤、肝硬化、先天性肝囊肿和其它良性肝占位性病变。一些原发性肝癌病人AFU活性显著升高,而肝功能多属正常,即无白球蛋白或谷丙转氨酶的明显改变,说明原发性肝癌时AFU的升高与肝功能及肝细胞坏死无明显关联,而是由癌肿本身合成增加及降解减慢所致。肝癌患者血清AFU升高的机制可能是:①肝癌细胞合成酶增加并大量释放入血。②血清AFU破坏减少,正常时肝枯否细胞从血清中清除AFU,肝癌时由于细胞免疫功能低下或其他原因使枯否细胞清除AFU的能力下降而表现为酶活性升高。③含岩藻糖的糖蛋白和糖脂的代谢紊乱。
3.3 最新研究发现,AFU测定在肾病、糖尿病、白血病等疾病中同样具有相当积极的作用。邵妙伟的研究结果中显示在糖尿病患者糖代谢失控的情况下AFU也可明显升高,而糖代谢在控时往往与正常对照无明显差异。因此,在临床诊断治疗中,AFU可作为糖尿病患者糖代谢控制的又一良好观察指标[ 4]。但就糖尿病糖代谢失控人群AFU升高的具体病理原因,目前还没有明确的解释,可能与糖代谢紊乱引起血管病变有关,血管病变导致组织器官(肝、肾等)的病变,最终致使血液AFU升高。
综上所述,多年来AFP作为原发性肝癌的诊断指标,虽有较高特异性和诊断价值,但仍有20%～30%的患者AFP阴性造成漏诊。AFU具有较高敏感性和特异性,可作为原发性肝癌诊断的新标记物,它和AFP联合检测可提高肝癌诊断率。AFU在肝脏肿块性质的鉴别诊断方面具有特殊的价值,应用于临床将能较大地提高原发性肝癌的诊断率,尤其是AFP阴性或低浓度阳性的患者,值得推广和应用。
参考文献
[1] 张抗,万雄萍.血清中α-L-岩藻糖苷酶及其在肝癌诊断中的作用[J].临床检验杂志,1994:12(4):214
[2] Deugnier Y,Le Treut A,Glaise D.A study of lysosomal euzyme activities in serum and leukocytes in chronic liver diseases.Clin Chim Acta,1980;108:385
[3] 于志伟,杨晓卫,段芳龄等.血清α-L-岩藻糖苷酶的测定方法[J].中华医学检验杂志,1992,15(3):139
[4] 邵妙伟.糖尿病患者血清a-L岩藻糖苷酶测定及临床意义[J].中华医药杂志, 2005,5(12)
作者单位:321000 浙江省金东区孝顺镇中心卫生院1
321000 浙江省金东区东孝街道卫生院2
1 AFU的基本特性
AFU是一种溶酶体酸性水解酶,化学本质是一种糖蛋白。分类名为α-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶(EC3.2.1.51)。血清中AFU的分子量为270KD～390KD。基本生理功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷的分解代谢。广泛分布于人体内的各种组织、细胞及体液中,如肝、脑、肾、胰、胎盘组织;细胞培养液中的成纤维细胞、白细胞以及血清、尿液、唾液、泪液和垂体液中均含此酶。AFU在人体内呈多形性,有三型同工酶,即AFU1、AFU1-2、AFU2,是由1个位于第1号染色体短臂(1,P34)上基因位点的2个等位基因所表达,高活性的AFU1由基因FU1所表达,低活性的AFU2由基因FU2所决定,而AFU1-2则由FU1-FU2两个基因的杂合子所决定。以往AFU主要用于遗传性AFU缺乏引起的岩藻糖贮积病的诊断,并借此与其他遗传性粘多糖贮积病相鉴别。1980年Deugnier[ 2]首先发现肝癌患者血清AFU活性明显高于正常人,从而为诊断原发性肝癌提供了新的指标。
2 AFU的实验室检测。血清AFU测定主要有荧光法和比色法
2.1 荧光法。AFU可水解4-甲基伞形酮a-L-岩藻呲喃糖苷,释放出4-甲基伞形酮,用碱性缓冲液终止反应并使产物呈现荧光。在360nm激发波长和400nm发射波长下检测荧光强度。对照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求得酶活性。此法敏感性高,最低检出限0.06U/L。既适用于血清,也适用于活检组织、细胞、脑脊液和泪液等量小的生物样本,以及AFU活性低的标本。用等聚焦电泳分离AFU同工酶时,也多利用此荧光底物显示酶区带。
2.2 比色法。以4-硝基苯a-L-岩藻呲喃糖苷为底物,本法简便,设备要求不高,国内外广泛采用。经过多次改良后,目前的商品试剂盒有效减少了样品中其它物质对测定的干扰,增加了反应速度。尤其利用4-NP摩尔吸光度计算酶活性,取代传统的标准曲线,既减化了操作,又利于自动化分析。最新实验用氯化对硝基苯a-L-岩藻呲喃糖苷做AFU的底物,可以使酶反应的最适合条件和显色环境相一致,不仅大大提高了反应灵敏度和精密度,而且大大提高了反应的抗干扰性,基本解决了溶血、黄疸、脂血的基质效应问题,是目前AFU测定方法学的重大突破[ 3]。
3 AFU的临床应用及体会
3.1 正常组织糖苷酶的释放率变化很小(孕妇除外),从而使血清糖苷酶维持在一定范围内。血清AFU升高主要见于原发性肝癌,阳性率为81.2%,与AFP联合检测,可提高肝癌的诊断阳性率达93.1%。AFU活性高低与肝癌的大小和AFP浓度无明显相关。有些肝癌体积很小,但AFU活性明显升高,因此可作为原发性肝癌的早期诊断参考指标。肝癌术后观察血清AFU的水平,也可用于监测疗效。肺癌、乳腺癌、子宫癌以及肝硬化、糖尿病也可见升高。妊娠期间,AFU升高,分娩后血清AFU迅速下降。
3.2 原发性肝癌病人的AFU活性显著高于继发性肝癌、胆管细胞癌、恶性血管内皮细胞瘤、恶性间皮细胞瘤、肝硬化、先天性肝囊肿和其它良性肝占位性病变。一些原发性肝癌病人AFU活性显著升高,而肝功能多属正常,即无白球蛋白或谷丙转氨酶的明显改变,说明原发性肝癌时AFU的升高与肝功能及肝细胞坏死无明显关联,而是由癌肿本身合成增加及降解减慢所致。肝癌患者血清AFU升高的机制可能是:①肝癌细胞合成酶增加并大量释放入血。②血清AFU破坏减少,正常时肝枯否细胞从血清中清除AFU,肝癌时由于细胞免疫功能低下或其他原因使枯否细胞清除AFU的能力下降而表现为酶活性升高。③含岩藻糖的糖蛋白和糖脂的代谢紊乱。
3.3 最新研究发现,AFU测定在肾病、糖尿病、白血病等疾病中同样具有相当积极的作用。邵妙伟的研究结果中显示在糖尿病患者糖代谢失控的情况下AFU也可明显升高,而糖代谢在控时往往与正常对照无明显差异。因此,在临床诊断治疗中,AFU可作为糖尿病患者糖代谢控制的又一良好观察指标[ 4]。但就糖尿病糖代谢失控人群AFU升高的具体病理原因,目前还没有明确的解释,可能与糖代谢紊乱引起血管病变有关,血管病变导致组织器官(肝、肾等)的病变,最终致使血液AFU升高。
综上所述,多年来AFP作为原发性肝癌的诊断指标,虽有较高特异性和诊断价值,但仍有20%～30%的患者AFP阴性造成漏诊。AFU具有较高敏感性和特异性,可作为原发性肝癌诊断的新标记物,它和AFP联合检测可提高肝癌诊断率。AFU在肝脏肿块性质的鉴别诊断方面具有特殊的价值,应用于临床将能较大地提高原发性肝癌的诊断率,尤其是AFP阴性或低浓度阳性的患者,值得推广和应用。
参考文献
[1] 张抗,万雄萍.血清中α-L-岩藻糖苷酶及其在肝癌诊断中的作用[J].临床检验杂志,1994:12(4):214
[2] Deugnier Y,Le Treut A,Glaise D.A study of lysosomal euzyme activities in serum and leukocytes in chronic liver diseases.Clin Chim Acta,1980;108:385
[3] 于志伟,杨晓卫,段芳龄等.血清α-L-岩藻糖苷酶的测定方法[J].中华医学检验杂志,1992,15(3):139
[4] 邵妙伟.糖尿病患者血清a-L岩藻糖苷酶测定及临床意义[J].中华医药杂志, 2005,5(12)
作者单位:321000 浙江省金东区孝顺镇中心卫生院1
321000 浙江省金东区东孝街道卫生院2