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时间飞逝,在过去的一个多月的实习时间里,有三个不同的实践感悟,分别是:单位与学校的区别,外派工作的体验,实验方法总结。这三个方面是我这次实践真真切切体会到的有感己悟,亦是我这段不同人生经历的最宝贵的记忆。
(一)单位与学校
2019年5月20日,从学校怀着忐忑与激动的心情乘着大巴来到中国动物卫生与流行病学中心,这是我第二次来到这个地方。第一次我是被我们单虎教授派过来为他的一个项目盖章签字,因为当时只是在前面的办公楼浏览,觉得这个地方很有园林之美的韵味。
这次我随老师前往后面的实验楼,给我的感觉就是现代化与园林艺术的融合,在我们学校的话,园林艺术与现代高楼是泾渭分明的,在这建筑方面各有千秋。进入实验楼,大家一起开了个短暂的会议,然后老师带我们来到了我们实践的目的地动物产品安全检测室。这里的第一感觉特别像我们做药物化学实践的实验室,老师带我们参观了所有的实验仪器,这里的实验条件比我们学校强太多了,像那种超高速低温离心机我在学校见过两台,而且也有些年份了,但是在这里的仪器室我就见到了四台,最老型号的和我们学校最新型号的是完全一样的,这既给我了深深的震撼也让我有点为学校感到悲哀。
其后师姐领我们去宿舍安顿好行李物品。宿舍分为两个部分:前厅,臥室,卫生间。师姐说可以在前厅做饭吃(在过去的一个多月中我们没有做过),卫生间不大,但是可以解决除洗澡外的生活问题,卧室是标准的八人间宿舍但是只有四个人住,很宽敞。在学校我们的宿舍是六人间,房间左面是一排桌子,右面是上下床,里面有一个小阳台可以晾晒衣服,相较来说动卫中心的宿舍更大更方便,学校的宿舍小巧精致温馨。中午去食堂吃饭,这里的早餐和中餐都是以自助的形式自由拿取,我这胖了5斤的肉就是这么吃出来的。
下午科室的老师做实验,我们在一旁观看学习。晚上我们坐着公交车去最近的超市采购东西,在学校的话,宿舍周围就可以买到所有物品,在生活方面这里不如学校便利。在单位感觉比在学校学习轻松很多,但是在轻松的同时意味着相对单调的生活,这里的生活就像三点一线的高中,我们在宿舍、食堂和实验室中来回穿梭,在学校你可以感受各种各样的校园活动,可以是动听的歌声,可以是炫酷的舞姿,可以是读书辩论,这些在这里都没有,相对单调但是能让人更专注的投入到工作,目的不相同,方式不相同,结果亦然不会相同。
(二)外派工作的体验
6月5日上午,我们跟随老师做完上午的实验步骤,然后老师对我和我同学说,这次因为人手不够,不得已将你俩派出去采集做实验的样品,我去青海,另一个去湖北,于是我俩怀着忐忑的心情,跟随各自的带队老师于6月10日出发。
6月10日下午2时45分登上去青海的飞机,6月10日下午6时10分到达西宁的机场。由当地的农业厅接机到了西宁市的一家酒店安顿行李,在路上我感到头有轻微的发胀感,不知是有高原反应还是晕车,当地的农业厅人员接待吃了顿晚饭,我看到在傍晚8时30分的时候太阳才渐渐西下,这也许是高海拔或是西部的原因吧,在饭桌上都是一群老江湖,在不经意间就在套话,我这涉事未深的少年最好的应对方式就是少说话多吃饭。
高海拔地区比平原地区最大的区别就是缺少氧气,喝了两杯实在推不掉的酒我就不喝了,主要是怕出现危险。晚上9时30分,我和带队的老师来到我的房间准备第二天采样所需要的物品,然后说好第二天的分工之后,10时40分,老师回到自己的房间休息,我向去湖北的同学询相关的情况,11时14分时我说了一声:明天酒醒了回我。
第二天7时10分,从睡梦中起来,看了看手机,6时14分时他回了我一句:昨晚啥都不知道了。作为两名还未毕业的大学生,这次行动确实是对我们的一份磨炼!在省农业厅的前辈们可能学校传授的书面知识不如我们记得熟,但是在社会上的摸爬滚打所磨练出来为人处事能力远超过我们,大学能教我在社会上谋生的技能,我们与他们相差的是谋生的智慧,这是我们要一生学习的东西。
简单洗漱后,来到楼下,与老师一起吃的早餐并在微信上与当地约定上午9点去屠宰场取样,但是9时27分当地的人才过来。在9时10分老师在其实已经不太高兴了,老师告诉我做事约定时间,绝对不能迟到,但是当地的人来时候也是和颜悦色的并连说没事,我在这时候知道了什么叫做涵养。上午10时15分来到采样的屠宰场,样品集中在当地的检测室,刚开始与老师合作有些生涩,在熟悉流程之后好了很多,我负责收集样品,老师负责写采集报告,上午11时15分奔赴下一个采集地点采集样品,当时天气不太好,我们去的是当地的畜牧局,在当地的一位先生的帮助下很快完成了分拣工作,吃了简单的一顿午饭后来到一个清真屠宰场,这里是采样最最困难的地方。
第一次采集的时候,他们当地将所有的样品混到了一起,没办法只能告诉当地的人第二天中午再来采集。晚上回到酒店宾馆将所有样品整理好后,我跟老师一起去当地的小吃街吃晚饭。青海在我的印象里真的没有什么特色,在我来青海之前唯一知道只有青海湖,在小吃街里可以看到来到四方的小吃,但是唯独没有青海的特色,感觉像我小时候的看到的《邯郸学步》的故事,学会了四方的舞姿最后却忘记了自己原来的样子。
我现在还在求学阶段,往后八年内可能还是在求学之中,学四方之技,但是不能忘记自己,就像习总书记说的不忘初心,这是我在社会中应铭记的。第三天,我们去了海东市的采样地点,这是当地的一个扶贫项目,它在村子的深处的艳阳高照的地方,但是当我们来到屋子里面的时候,明明没有开冷气但是却能在屋子里感到凉意,很快完成了工作,与当地的老板闲聊,了解到当地的畜牧来源于新疆,但是从他口中得到消息,近年因为非洲猪瘟造成猪肉产量减少,但是猪肉需求不减反增,造成猪肉价格上涨,利益几乎成倍增加,如果利益超过百分之三百,一些人会突破任何底线,非洲猪瘟现在治疗技术还不健全,最重要的手段是进行防控,控制传染源的交通是重要的防控一环,但是在利益面前偷渡运猪真的会出来,世事难料啊,这个犯罪成本很低,控制不起来就会造成封锁线突破,希望在这个特殊时期能有些特殊的手段吧。 聊了一会儿后,因为时间已经不早了,我们去了当地的一家饭馆吃饭,这里是西宁的最特色小吃的地方,我们在这里吃了酿皮和绿面饭。这里的人也喜欢吃辣,但是他们的偏向于干粉辣,就是吃完之后感觉在嘴里黏上干粉的感觉,我问当地老板为什么像这种特色的饭店为什么这么少,他回答说这里的人跟喜欢来自中国四方的食物,其他的我没多问,每个地方都有每个地方的长处与难处。
中午吃完饭后,我们来到了昨天采样的清真屠宰场,这次所有样品都分好类了,但是就是样品太少了,最少的羊尿只有几滴,没办法,在询问过领导之后我们将物品收集起来算是完成了任务。因为时间还早,在将样品冷冻之后,我们顺路去了藏药文化博物馆,见识了独特的藏医文化,在保护独特的非物质文化遗产上国家还是高度重视的,江泽民主席后的主席和总理都先后视察了这里。
在6月14日下午6:50分,我们安全回到了青岛,说来也奇怪,我在青海没事,到了家里却感觉头晕,可能氧气浓度对那时候的我太高了吧。这次出差与其说是工作,更多的像是一场修炼旅行。老人常说红尘练心对我们年轻人很重要,但是这场试炼一旦开始了,就没有结束,这是一场用一生来答复的考试,没有什么标准的对与错,只有值得还是不值得。
(三)实验方法总结
在中國动物卫生与流行病学中心过去的六周中,我们主要学到的实验主要是从猪肝或是猪尿中检测多药物的残留,其中的主要方法分为两个:
第一种方法适用于检测瘦肉精在内的多药物残留。
在实验的最开始设置空白对照组,可设空白猪肝对照或是试剂空白对照,同时设置基质校正样品,此项操作就是在设置的空白猪肝里加入标准品,此项操作又称为添加回收,目的是在液相色谱仪中形成标准,从而与样品进行比较检测是否超标。
其后每个样品中加入8ml乙酸乙酯提取液,同时每个样品中加入1ml氨水,乙酸乙酯能提取出样品中的药物,氨水的目的是是调节样品的PH,因为在在初步处理中是进行液液萃取的,PH对具有酸碱性的物质的溶解性或分配系数影响很大,调节PH使组分在水相中处于中性分子状态,或是达到两性分子的等电点,水溶性降低易被有机溶剂萃取,而这里的有机溶剂就是乙酸乙酯。
在加入乙酸乙酯和氨水后,分别用涡动仪涡动,其后用振动仪振动,这个步骤的目的是让试剂与样品充分混合。
其后采用高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液,但是样品中的药物可能还没有提取完全,需要再次提取。
在离心后的提取物中加入8ml乙酸乙酯,再加入0.5ml氨水,用涡动仪涡动,用振动仪振动,再次用相同条件的离心机离心,将两次上清液合并,此次是将样品中的所有药物混合。
其后将合并的上清液放到氮吹仪上氮吹,这个步骤是将多余的物质吹掉,同时将药物进行吹干浓缩。
在吹干后拿出样品,用3ml的8:2的千分之一的甲酸水比乙腈溶液进行复溶,其后用涡动仪涡动使溶剂与药物充分混合后,放入高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液。因为接下来就是应用反相固相萃取法,复溶液也是样品通过的SPE小柱的溶剂,在反相SPE中是药物保留的条件必须是水、缓冲液或是低浓度的乙腈或甲醇这是为什么采用这种复溶液的原因。在加入样品之前要将MCX或是PCX小柱活化(两种小柱均为阳离子交换小柱)采用3ml甲醇,3ml纯水,3ml千分之一的甲酸水进行活化,这三种试剂作用分别是甲醇作为有机溶剂过柱活化,纯水起到平衡的作用,而甲酸水是用来进行调节小柱的PH,PH值在这固相萃取中由为重要,他是保证离子化的的必要条件。其后检测样品的PH值,样品的PH值必须要小于其PKA两个单位,目的是保证其带电荷。用千分之一的甲酸水缓冲溶液调节完成后加入小柱内,其后用3ml纯水,3ml甲醇进行淋洗,目的是为了除去不需要的组分或杂质。其后将小管进行抽干,用3ml百分之五的氨化甲醇进行洗脱,选取百分之五的氨化甲醇的原因是因为洗脱溶液必须大于其PKA的两个单位,目的是中和分析物的电荷。
其后再次进行氮吹,这个步骤是将多余的物质吹掉,同时将药物进行吹干浓缩。
之后在空白猪肝样品加入标准品,这个步骤是基质矫正曲线,是为了在液相中调整标准曲线的,其后采用1ml的9:1的千分之一甲酸水比乙腈溶液进行复溶,其后用涡动仪涡动使溶剂充分溶合,采用这种溶液进行复溶是因为这种溶液在液相分析仪中能稳定出现数值。将复溶之后的溶液过滤膜装进检测小瓶,这是为了去除杂质,保证样品澄清。
第二种方法是检测大环内酯和喹诺酮类药物。
在实验的最开始设置空白对照组,可设空白猪肝对照或是试剂空白对照,同时设置基质校正样品,此项操作就是在设置的空白猪肝里加入标准品,此项操作又称为添加回收,目的是在液相色谱仪中形成标准,从而与样品进行比较检测是否超标。
其后每个样品加入8ml0.1mol每升的磷酸盐提取液,因为在猪肝样品中药物易溶解在这种提取液,其后每个样品加入2.5gNacl,其目的是采用盐析,使样品在离心过程中沉淀,使上清液更加澄清。
在加入磷酸盐提取液和盐后,分别用涡动仪涡动,其后用振动仪振动,这个步骤的目的是让试剂与样品充分混合。
其后采用高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液,但是样品中的药物可能还没有提取完全,需要再次提取。
在离心后的提取物中加入8ml磷酸盐提取液后,用涡动仪涡动,用振动仪振动,再次用相同条件的离心机离心,将两次上清液合并,此次是将样品中的所有药物混合。
其后将在样品上清液中加入16微升甲酸,调节上清液的PH值,样品的PH值必须要小于其PKA两个单位,目的是保证其带电荷。其后采用高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液4ml. 在加入样品之前要将MCX或是PCX小柱活化(两种小柱均为阳离子交换小柱)采用3ml甲醇,3ml纯水,3ml千分之一的甲酸水进行活化,这三种试剂作用分别是甲醇作为有机溶剂过柱活化,纯水起到平衡的作用,而甲酸水是用来进行调节小柱的PH。将提取的4ml上清液倒入小管内,其后用3ml纯水,3ml甲醇进行淋洗,目的是为了除去不需要的组分或杂质。其后将小管进行抽干,用3ml百分之五的氨化甲醇进行洗脱,选取百分之五的氨化甲醇的原因是因为洗脱溶液必须大于其PKA的兩个单位,目的是中和分析物的电荷。
其后再次进行氮吹,这个步骤是将多余的物质吹掉,同时将药物进行吹干浓缩。
之后在空白猪肝样品加入标准品,这个步骤是基质矫正曲线,是为了在液相中调整标准曲线的,其后采用1ml的9:1的千分之一甲酸水比乙腈溶液进行复溶,其后用涡动仪涡动使溶剂充分溶合,采用这种溶液进行复溶是因为这种溶液在液相分析仪中能稳定出现数值。将复溶之后的溶液过滤膜装进检测小瓶,这是为了去除杂质,保证样品澄清。
这两种方法是我学习的两种检测方法,上面详细描述了猪肝药物检测方法,猪尿的检测是做合并上清液之后的步骤。不同的是在活化中应用千分之五的甲酸水,在淋洗的时候应用百分之三十的甲醇水,在最后复溶的时候应用8:2千分之一的甲酸水比乙腈溶液。
其实在上述的过程中有很多的精确加入或是配置的药品,我问过老师,为什么加入这种比例或是浓度的溶剂,老师说这是在不断改进中,逐渐改变一个变量总结出来的方法。实验是枯燥的,在尝试中改变是创造新方法的必要条件,这给了我启发,以后我在我的研究生生涯中,是不是可以应用这种思路去创作或是构思我的实验或是属于我自己的实验方法,现在唯一的遗憾就是没有把液相分析仪的技术学熟,这是我以后做实验必要学习的内容,下周师姐会带我们学习,一定要加油,为了自己将来,奋斗吧。
在这一个月中,我出现很多失误,有很多的不足,这让我看清我有哪些需要强化,有哪些需要改正。我是一个不断进行尝试与探索的青年,去过最发达的国家旅行,也去过最基层的农村调研。但是这次实践是最特别的记忆,在这里我真正应用自己的所学去观察了这个我未来可能投身的行业。我们青年在社会面前还很稚嫩,但是我们还有比别人年轻的资本,我们会在不断学习中改进与成长,我们拥有无限的可能。
感谢老师给我这次实践的机会,在这里学习的道理,我终身受益。
(一)单位与学校
2019年5月20日,从学校怀着忐忑与激动的心情乘着大巴来到中国动物卫生与流行病学中心,这是我第二次来到这个地方。第一次我是被我们单虎教授派过来为他的一个项目盖章签字,因为当时只是在前面的办公楼浏览,觉得这个地方很有园林之美的韵味。
这次我随老师前往后面的实验楼,给我的感觉就是现代化与园林艺术的融合,在我们学校的话,园林艺术与现代高楼是泾渭分明的,在这建筑方面各有千秋。进入实验楼,大家一起开了个短暂的会议,然后老师带我们来到了我们实践的目的地动物产品安全检测室。这里的第一感觉特别像我们做药物化学实践的实验室,老师带我们参观了所有的实验仪器,这里的实验条件比我们学校强太多了,像那种超高速低温离心机我在学校见过两台,而且也有些年份了,但是在这里的仪器室我就见到了四台,最老型号的和我们学校最新型号的是完全一样的,这既给我了深深的震撼也让我有点为学校感到悲哀。
其后师姐领我们去宿舍安顿好行李物品。宿舍分为两个部分:前厅,臥室,卫生间。师姐说可以在前厅做饭吃(在过去的一个多月中我们没有做过),卫生间不大,但是可以解决除洗澡外的生活问题,卧室是标准的八人间宿舍但是只有四个人住,很宽敞。在学校我们的宿舍是六人间,房间左面是一排桌子,右面是上下床,里面有一个小阳台可以晾晒衣服,相较来说动卫中心的宿舍更大更方便,学校的宿舍小巧精致温馨。中午去食堂吃饭,这里的早餐和中餐都是以自助的形式自由拿取,我这胖了5斤的肉就是这么吃出来的。
下午科室的老师做实验,我们在一旁观看学习。晚上我们坐着公交车去最近的超市采购东西,在学校的话,宿舍周围就可以买到所有物品,在生活方面这里不如学校便利。在单位感觉比在学校学习轻松很多,但是在轻松的同时意味着相对单调的生活,这里的生活就像三点一线的高中,我们在宿舍、食堂和实验室中来回穿梭,在学校你可以感受各种各样的校园活动,可以是动听的歌声,可以是炫酷的舞姿,可以是读书辩论,这些在这里都没有,相对单调但是能让人更专注的投入到工作,目的不相同,方式不相同,结果亦然不会相同。
(二)外派工作的体验
6月5日上午,我们跟随老师做完上午的实验步骤,然后老师对我和我同学说,这次因为人手不够,不得已将你俩派出去采集做实验的样品,我去青海,另一个去湖北,于是我俩怀着忐忑的心情,跟随各自的带队老师于6月10日出发。
6月10日下午2时45分登上去青海的飞机,6月10日下午6时10分到达西宁的机场。由当地的农业厅接机到了西宁市的一家酒店安顿行李,在路上我感到头有轻微的发胀感,不知是有高原反应还是晕车,当地的农业厅人员接待吃了顿晚饭,我看到在傍晚8时30分的时候太阳才渐渐西下,这也许是高海拔或是西部的原因吧,在饭桌上都是一群老江湖,在不经意间就在套话,我这涉事未深的少年最好的应对方式就是少说话多吃饭。
高海拔地区比平原地区最大的区别就是缺少氧气,喝了两杯实在推不掉的酒我就不喝了,主要是怕出现危险。晚上9时30分,我和带队的老师来到我的房间准备第二天采样所需要的物品,然后说好第二天的分工之后,10时40分,老师回到自己的房间休息,我向去湖北的同学询相关的情况,11时14分时我说了一声:明天酒醒了回我。
第二天7时10分,从睡梦中起来,看了看手机,6时14分时他回了我一句:昨晚啥都不知道了。作为两名还未毕业的大学生,这次行动确实是对我们的一份磨炼!在省农业厅的前辈们可能学校传授的书面知识不如我们记得熟,但是在社会上的摸爬滚打所磨练出来为人处事能力远超过我们,大学能教我在社会上谋生的技能,我们与他们相差的是谋生的智慧,这是我们要一生学习的东西。
简单洗漱后,来到楼下,与老师一起吃的早餐并在微信上与当地约定上午9点去屠宰场取样,但是9时27分当地的人才过来。在9时10分老师在其实已经不太高兴了,老师告诉我做事约定时间,绝对不能迟到,但是当地的人来时候也是和颜悦色的并连说没事,我在这时候知道了什么叫做涵养。上午10时15分来到采样的屠宰场,样品集中在当地的检测室,刚开始与老师合作有些生涩,在熟悉流程之后好了很多,我负责收集样品,老师负责写采集报告,上午11时15分奔赴下一个采集地点采集样品,当时天气不太好,我们去的是当地的畜牧局,在当地的一位先生的帮助下很快完成了分拣工作,吃了简单的一顿午饭后来到一个清真屠宰场,这里是采样最最困难的地方。
第一次采集的时候,他们当地将所有的样品混到了一起,没办法只能告诉当地的人第二天中午再来采集。晚上回到酒店宾馆将所有样品整理好后,我跟老师一起去当地的小吃街吃晚饭。青海在我的印象里真的没有什么特色,在我来青海之前唯一知道只有青海湖,在小吃街里可以看到来到四方的小吃,但是唯独没有青海的特色,感觉像我小时候的看到的《邯郸学步》的故事,学会了四方的舞姿最后却忘记了自己原来的样子。
我现在还在求学阶段,往后八年内可能还是在求学之中,学四方之技,但是不能忘记自己,就像习总书记说的不忘初心,这是我在社会中应铭记的。第三天,我们去了海东市的采样地点,这是当地的一个扶贫项目,它在村子的深处的艳阳高照的地方,但是当我们来到屋子里面的时候,明明没有开冷气但是却能在屋子里感到凉意,很快完成了工作,与当地的老板闲聊,了解到当地的畜牧来源于新疆,但是从他口中得到消息,近年因为非洲猪瘟造成猪肉产量减少,但是猪肉需求不减反增,造成猪肉价格上涨,利益几乎成倍增加,如果利益超过百分之三百,一些人会突破任何底线,非洲猪瘟现在治疗技术还不健全,最重要的手段是进行防控,控制传染源的交通是重要的防控一环,但是在利益面前偷渡运猪真的会出来,世事难料啊,这个犯罪成本很低,控制不起来就会造成封锁线突破,希望在这个特殊时期能有些特殊的手段吧。 聊了一会儿后,因为时间已经不早了,我们去了当地的一家饭馆吃饭,这里是西宁的最特色小吃的地方,我们在这里吃了酿皮和绿面饭。这里的人也喜欢吃辣,但是他们的偏向于干粉辣,就是吃完之后感觉在嘴里黏上干粉的感觉,我问当地老板为什么像这种特色的饭店为什么这么少,他回答说这里的人跟喜欢来自中国四方的食物,其他的我没多问,每个地方都有每个地方的长处与难处。
中午吃完饭后,我们来到了昨天采样的清真屠宰场,这次所有样品都分好类了,但是就是样品太少了,最少的羊尿只有几滴,没办法,在询问过领导之后我们将物品收集起来算是完成了任务。因为时间还早,在将样品冷冻之后,我们顺路去了藏药文化博物馆,见识了独特的藏医文化,在保护独特的非物质文化遗产上国家还是高度重视的,江泽民主席后的主席和总理都先后视察了这里。
在6月14日下午6:50分,我们安全回到了青岛,说来也奇怪,我在青海没事,到了家里却感觉头晕,可能氧气浓度对那时候的我太高了吧。这次出差与其说是工作,更多的像是一场修炼旅行。老人常说红尘练心对我们年轻人很重要,但是这场试炼一旦开始了,就没有结束,这是一场用一生来答复的考试,没有什么标准的对与错,只有值得还是不值得。
(三)实验方法总结
在中國动物卫生与流行病学中心过去的六周中,我们主要学到的实验主要是从猪肝或是猪尿中检测多药物的残留,其中的主要方法分为两个:
第一种方法适用于检测瘦肉精在内的多药物残留。
在实验的最开始设置空白对照组,可设空白猪肝对照或是试剂空白对照,同时设置基质校正样品,此项操作就是在设置的空白猪肝里加入标准品,此项操作又称为添加回收,目的是在液相色谱仪中形成标准,从而与样品进行比较检测是否超标。
其后每个样品中加入8ml乙酸乙酯提取液,同时每个样品中加入1ml氨水,乙酸乙酯能提取出样品中的药物,氨水的目的是是调节样品的PH,因为在在初步处理中是进行液液萃取的,PH对具有酸碱性的物质的溶解性或分配系数影响很大,调节PH使组分在水相中处于中性分子状态,或是达到两性分子的等电点,水溶性降低易被有机溶剂萃取,而这里的有机溶剂就是乙酸乙酯。
在加入乙酸乙酯和氨水后,分别用涡动仪涡动,其后用振动仪振动,这个步骤的目的是让试剂与样品充分混合。
其后采用高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液,但是样品中的药物可能还没有提取完全,需要再次提取。
在离心后的提取物中加入8ml乙酸乙酯,再加入0.5ml氨水,用涡动仪涡动,用振动仪振动,再次用相同条件的离心机离心,将两次上清液合并,此次是将样品中的所有药物混合。
其后将合并的上清液放到氮吹仪上氮吹,这个步骤是将多余的物质吹掉,同时将药物进行吹干浓缩。
在吹干后拿出样品,用3ml的8:2的千分之一的甲酸水比乙腈溶液进行复溶,其后用涡动仪涡动使溶剂与药物充分混合后,放入高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液。因为接下来就是应用反相固相萃取法,复溶液也是样品通过的SPE小柱的溶剂,在反相SPE中是药物保留的条件必须是水、缓冲液或是低浓度的乙腈或甲醇这是为什么采用这种复溶液的原因。在加入样品之前要将MCX或是PCX小柱活化(两种小柱均为阳离子交换小柱)采用3ml甲醇,3ml纯水,3ml千分之一的甲酸水进行活化,这三种试剂作用分别是甲醇作为有机溶剂过柱活化,纯水起到平衡的作用,而甲酸水是用来进行调节小柱的PH,PH值在这固相萃取中由为重要,他是保证离子化的的必要条件。其后检测样品的PH值,样品的PH值必须要小于其PKA两个单位,目的是保证其带电荷。用千分之一的甲酸水缓冲溶液调节完成后加入小柱内,其后用3ml纯水,3ml甲醇进行淋洗,目的是为了除去不需要的组分或杂质。其后将小管进行抽干,用3ml百分之五的氨化甲醇进行洗脱,选取百分之五的氨化甲醇的原因是因为洗脱溶液必须大于其PKA的两个单位,目的是中和分析物的电荷。
其后再次进行氮吹,这个步骤是将多余的物质吹掉,同时将药物进行吹干浓缩。
之后在空白猪肝样品加入标准品,这个步骤是基质矫正曲线,是为了在液相中调整标准曲线的,其后采用1ml的9:1的千分之一甲酸水比乙腈溶液进行复溶,其后用涡动仪涡动使溶剂充分溶合,采用这种溶液进行复溶是因为这种溶液在液相分析仪中能稳定出现数值。将复溶之后的溶液过滤膜装进检测小瓶,这是为了去除杂质,保证样品澄清。
第二种方法是检测大环内酯和喹诺酮类药物。
在实验的最开始设置空白对照组,可设空白猪肝对照或是试剂空白对照,同时设置基质校正样品,此项操作就是在设置的空白猪肝里加入标准品,此项操作又称为添加回收,目的是在液相色谱仪中形成标准,从而与样品进行比较检测是否超标。
其后每个样品加入8ml0.1mol每升的磷酸盐提取液,因为在猪肝样品中药物易溶解在这种提取液,其后每个样品加入2.5gNacl,其目的是采用盐析,使样品在离心过程中沉淀,使上清液更加澄清。
在加入磷酸盐提取液和盐后,分别用涡动仪涡动,其后用振动仪振动,这个步骤的目的是让试剂与样品充分混合。
其后采用高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液,但是样品中的药物可能还没有提取完全,需要再次提取。
在离心后的提取物中加入8ml磷酸盐提取液后,用涡动仪涡动,用振动仪振动,再次用相同条件的离心机离心,将两次上清液合并,此次是将样品中的所有药物混合。
其后将在样品上清液中加入16微升甲酸,调节上清液的PH值,样品的PH值必须要小于其PKA两个单位,目的是保证其带电荷。其后采用高速低温离心机8000-11000r离心6分钟,在4摄氏度下提取上清液4ml. 在加入样品之前要将MCX或是PCX小柱活化(两种小柱均为阳离子交换小柱)采用3ml甲醇,3ml纯水,3ml千分之一的甲酸水进行活化,这三种试剂作用分别是甲醇作为有机溶剂过柱活化,纯水起到平衡的作用,而甲酸水是用来进行调节小柱的PH。将提取的4ml上清液倒入小管内,其后用3ml纯水,3ml甲醇进行淋洗,目的是为了除去不需要的组分或杂质。其后将小管进行抽干,用3ml百分之五的氨化甲醇进行洗脱,选取百分之五的氨化甲醇的原因是因为洗脱溶液必须大于其PKA的兩个单位,目的是中和分析物的电荷。
其后再次进行氮吹,这个步骤是将多余的物质吹掉,同时将药物进行吹干浓缩。
之后在空白猪肝样品加入标准品,这个步骤是基质矫正曲线,是为了在液相中调整标准曲线的,其后采用1ml的9:1的千分之一甲酸水比乙腈溶液进行复溶,其后用涡动仪涡动使溶剂充分溶合,采用这种溶液进行复溶是因为这种溶液在液相分析仪中能稳定出现数值。将复溶之后的溶液过滤膜装进检测小瓶,这是为了去除杂质,保证样品澄清。
这两种方法是我学习的两种检测方法,上面详细描述了猪肝药物检测方法,猪尿的检测是做合并上清液之后的步骤。不同的是在活化中应用千分之五的甲酸水,在淋洗的时候应用百分之三十的甲醇水,在最后复溶的时候应用8:2千分之一的甲酸水比乙腈溶液。
其实在上述的过程中有很多的精确加入或是配置的药品,我问过老师,为什么加入这种比例或是浓度的溶剂,老师说这是在不断改进中,逐渐改变一个变量总结出来的方法。实验是枯燥的,在尝试中改变是创造新方法的必要条件,这给了我启发,以后我在我的研究生生涯中,是不是可以应用这种思路去创作或是构思我的实验或是属于我自己的实验方法,现在唯一的遗憾就是没有把液相分析仪的技术学熟,这是我以后做实验必要学习的内容,下周师姐会带我们学习,一定要加油,为了自己将来,奋斗吧。
在这一个月中,我出现很多失误,有很多的不足,这让我看清我有哪些需要强化,有哪些需要改正。我是一个不断进行尝试与探索的青年,去过最发达的国家旅行,也去过最基层的农村调研。但是这次实践是最特别的记忆,在这里我真正应用自己的所学去观察了这个我未来可能投身的行业。我们青年在社会面前还很稚嫩,但是我们还有比别人年轻的资本,我们会在不断学习中改进与成长,我们拥有无限的可能。
感谢老师给我这次实践的机会,在这里学习的道理,我终身受益。