【摘 要】
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根据本研究组已克隆的大白菜Class Ⅳ类几丁质酶基因序列设计引物,通过RT-PCR反应扩增得到该几丁质酶成熟肽基因CHB4,构建原核表达载体pET-CHB4,利用IPTG诱导表达并对诱导表
【机 构】
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安徽农业大学园艺学院,安徽农业大学生命科学学院
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根据本研究组已克隆的大白菜Class Ⅳ类几丁质酶基因序列设计引物,通过RT-PCR反应扩增得到该几丁质酶成熟肽基因CHB4,构建原核表达载体pET-CHB4,利用IPTG诱导表达并对诱导表达参数进行优化,SDS-PAGE分析表明,该基因表达的蛋白分子量为28 kD左右,其表达产物主要以包涵体的形式存在,25 ℃并没有改变表达蛋白的可溶性,而在pH 9.5的培养基条件下,诱导表达产物的上清液中却有重组蛋白条带出现.以酵母菌为指示菌做抑菌圈实验,结果显示IPTG浓度为0.6 mmol/L时抑菌效果最明显.几
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