【摘 要】
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遗传修饰蚊虫,使其不传播疾病或使蚊虫种群密度下降,是一种控制蚊媒传染病的新策略.该策略实施的前提是能够改造蚊虫的基因组,使得效应分子在适宜启动子驱动下,在转基因蚊中
【机 构】
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南方医科大学公共卫生与热带医学学院热带病研究所,广州,510515
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遗传修饰蚊虫,使其不传播疾病或使蚊虫种群密度下降,是一种控制蚊媒传染病的新策略.该策略实施的前提是能够改造蚊虫的基因组,使得效应分子在适宜启动子驱动下,在转基因蚊中高效特异表达.本研究旨在评价冈比亚按蚊卵黄蛋白原启动子驱动的中华按蚊防御素基因在转基因斯氏按蚊中的表达效果.克隆冈比亚按蚊卵黄蛋白原启动子序列,并将其与已克隆的中华按蚊防御素基因顺式插入穿梭载体 pSLFa,然后再插入转化载体 pBac[3xP3-DsRedafm] 的 Azc I位点;将重组质粒pBac[3xP3DsRed-AgVgT2-DefA]和帮助质粒phsp-pBac DNA 显微注射入斯氏按蚊的虫卵.通过观察 Gl代幼虫眼部的特异荧光筛选出两株转基因阳性品系;Southern blot证明,防御素基因的表达元件以单拷贝的形式插入到蚊基因组中;RT-PCR分析显示,防御素基因在吸血后雌蚊的脂肪体中得到了特异高效表达,而且防御素的表达比较内源性卵黄蛋白原能维持较长的时间,因此多次吸血后的防御素表达呈现出可调性非周期型,这对其发挥抗病原作用非常重要.结果表明,按蚊属蚊虫的卵黄蛋白原启动子和防御素基因在不同种按蚊中功能保守,可以作为转基因抗疟研究中的候选调控分子和功能分子.
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