【摘 要】
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胶原蛋白在人体内有重要作用，并且在食品、保健品、医疗等方面有广泛应用。该研究针对毕赤酵母的密码子偏好性对人源Ⅲ型胶原蛋白基因进行了密码子优化，在此基础上构建了人源Ⅲ型胶原蛋白单串联、二串联和二串联四拷贝表达载体pPIC9K-COL3-S、pPIC9K-COL3-2和pPIC9K-COL3-4，转化毕赤酵母GS115实现了人源Ⅲ型胶原蛋白的整合表达，获得了胶原蛋白单串联、胶原蛋白二串联和胶原蛋白二串
【基金项目】
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广东省自然科学基金资助项目（2022A1515010291）；
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胶原蛋白在人体内有重要作用，并且在食品、保健品、医疗等方面有广泛应用。该研究针对毕赤酵母的密码子偏好性对人源Ⅲ型胶原蛋白基因进行了密码子优化，在此基础上构建了人源Ⅲ型胶原蛋白单串联、二串联和二串联四拷贝表达载体pPIC9K-COL3-S、pPIC9K-COL3-2和pPIC9K-COL3-4，转化毕赤酵母GS115实现了人源Ⅲ型胶原蛋白的整合表达，获得了胶原蛋白单串联、胶原蛋白二串联和胶原蛋白二串联四拷贝的毕赤酵母工程菌株。对pPIC9K-COL3-S、pPIC9K-COL3-2重组菌株进行了摇瓶模拟高密度发酵，甲醇诱导浓度为0.5%，经SDS-PAGE和Western Blot检测，重组菌株成功表达了重组胶原蛋白，其中单串联蛋白表观分子量约为26.7ku，双串联蛋白表观分子量约为52.3ku。四拷贝重组菌株在0.5%甲醇诱导下的高密度摇瓶发酵产量最高，在最佳诱导时间为72 h时，蛋白产量达到约0.45 g/L。通过镍柱纯化后获得高纯度重组蛋白，抗氧化活性实验表明，重组胶原蛋白DPPH自由基清除率达到51.49%、ABTS自由基清除率达到41.24%，证明具有抗氧化活性，为其在食品，保健品和医疗领域的应用提供理论依据。
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