【摘 要】
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目的制备特异性抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18 E6多肽抗体。方法通过在线分析软件ABCpred和Bcepred预测HPV 18E6特异性多肽序列,将多肽序列与牛血清蛋白(bovin
【机 构】
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上海中医药大学附属普陀医院检验科,上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院检验科,上海中医药大学附属普陀医院实验中心
【基金项目】
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上海市科委引导项目(124119b1602,134119b1900);普陀区科委重大课题(2012PTKW001)
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目的制备特异性抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18 E6多肽抗体。方法通过在线分析软件ABCpred和Bcepred预测HPV 18E6特异性多肽序列,将多肽序列与牛血清蛋白(bovine albumin,BSA)偶联,以偶联后多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗HPV18 E6多肽单克隆抗体;以HPV18阳性分泌物标本DNA为模板,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得HPV 18 E6基因,将该基因插入表达质粒pET-28a,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-α-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;采用Western Blot方法鉴定抗HPV18 E6多肽抗体与目的蛋白的反应性。结果建立的杂交瘤细胞株能稳定产生HPV18 E6多肽单克隆抗体;重组表达质粒pET-28a-HPV18 E6测序证明构建正确,成功表达HPV18 E6蛋白;纯化后的抗HPV 18 E6多肽抗体可特异性识别原核表达HPV 18 E6蛋白。结论成功制备抗HPV18 E6多肽序列,该抗体具有较好的特异性。
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