【摘 要】
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为了克隆猪胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-I)以及检测该因子在各组织中的转录水平,分别提取猪13种组织RNA并反转录为cDNA,利用RT-PCR方法扩增IGF-I编码区全长序列,将纯化的片段与p
【机 构】
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云南农业职业技术学院畜牧兽医系; 云南农业大学农科专业基础实验教学示范中心; 云南农业大学动物科学技术学院;
【基金项目】
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云南省教育厅科学研究基金项目(2011Y058,2011Y219);国家自然科学基金项目(31160439);云南省应用基础研究计划面上项目(2010ZC241)
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为了克隆猪胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-I)以及检测该因子在各组织中的转录水平,分别提取猪13种组织RNA并反转录为cDNA,利用RT-PCR方法扩增IGF-I编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH 5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与牛等5个物种构建系统进化树。同时采用半定量RT-PCR方法分析IGF-I在猪13种组织中的表达情况。结果显示,猪IGF-I编码区全长462 bp(GenBank登录号:JX827417),编码153个氨基酸。氨基酸二级结构预测表明无规卷曲占的比例最大,为57.52%。氨基酸序列同源性分析表明,与牛、马、羊、鹿、鸡等5个物种的相似性分别为98.0%、97.4%、96.1%、96.1%、83%,多组织半定量RT-PCR研究表明IGF-I mRNA在猪的13个组织中均有表达,其中在肌肉、肝脏、脾脏、卵巢、大肠中表达量较高,其他组织略低。
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