采用超高效液相色谱-三重四级杆/复合线性离子阱质谱（QTrap UPLC -MS/MS）技术，创新性地结合谱库检索分析，建立了鸡蛋中氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素的快速检测确证方法。样品加入氯霉素-D5后，经乙腈提取，浓缩至干，3.00 mL水复溶，正己烷去脂净化，以乙腈-水为流动相，经Phenomenex Kinetex F5色谱柱(100 mm×3.0 mm, 2.6 μm)分离，用QTrap UPLC-MS/MS进行多反应监测(MRM)、信息依赖性扫描(IDA)、增强子离子扫描(EPI)和谱库检索分析。氯霉素内标法定量，氟苯尼考、甲砜霉素外标法定量。结果表明，氯霉素和氟苯尼考在0.03～50.0 μg/L，甲砜霉素在0.06～50.0 μg/L的线性范围内线性关系良好，相关系数r>0.999；氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素在3个加标水平下，平均回收率为90.1%～120.0%，精密度为4.2%～11.9%，检出限为0.05～0.10 μg/kg。该方法高效、简便、准确，可用于鸡蛋中酰胺醇类抗生素定性和定量分析。