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以伪狂犬病毒TK/gI缺失疫苗株为亲本株,提取病毒基因组DNA,用限制性内切酶Asc Ⅰ酶切基因组获得含完整PK基因的8.7kb片段。将此片段克隆入pPoly Ⅱ载体的Asc Ⅰ多克隆位点获得中间载体P8-AA。用限制性内切酶Sac Ⅰ+Nde Ⅰ缺失质粒P8-AA中PK基因的2218bp片段,在此缺失区插入已构建好的质粒pEGFP-CI-VP1中含绿色荧光蛋白基因和VP1基因的完整表达盒,构建出可用于同源重组的转移载体P8-EGFP-VP1。