目的 建立以特征离子为目标的鉴别蛇胆汁的方法，并用于检查蛇胆川贝液。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）测定蛇胆汁和其他动物胆汁的质谱数据，并进行主成分分析（PCA），找出蛇胆汁的特征成分。再用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS-MS）的多反应检测（MRM）定性和验证特征成分。针对蛇胆川贝液处方中的药材，制订供试品制备方法，并将蛇胆汁的MRM条件应用于蛇胆川贝液的检测中。结果 UPLC-Q-TOF-MS的液相方法条件为：甲醇（A）-10 mmol·L-1乙酸铵溶液（B），梯度洗脱（0～5 min，30%→50%A；5～20 min，50%→90%A；20～25 min，90%A；25～26 min，90%→30%A；26～30 min，30%A）；质谱条件为：电喷雾电离源（ESI-），干燥气温度：220℃，干燥气流速8 L·min-1，雾化气压力2 bar，毛细管电压3500 V，喷嘴电压500 V，扫描范围50～1000，扫描频率1 Hz。共找出两个蛇胆汁的专属性成分，分别为牛磺胆酸硫酸酯（SOTC）和牛磺去氧胆酸硫酸酯（SOTDC）。建立了SOTC和SOTDC的HPLC-MS-MS MRM方法，条件为：甲醇（A）-10 mmol·L-1乙酸铵溶液（B），梯度洗脱（0～10 min，40%→50%A；10～25 min，50%→80%A；25～25.5 min，80%→40%A；25.5～30 min，40%A），质谱条件为：电喷雾电离源（ESI-），SOTC的离子对为594.2→514.3，594.2→124.0；SOTDC为578.2→498.3，578.2→124.0。将建立的方法应用于41批蛇胆川贝液制剂中，发现40批样品均含有蛇胆汁。结论　该方法可有效鉴别蛇胆汁和检查蛇胆川贝液中是否含蛇胆汁。