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摘要：目的：通过课题研究，得到对肛肠手术术后并发症致病菌的最佳杀灭浓度，同时希望能将连霉药液的应用范围扩大，应用于所有的普外手术术后并发症的预防。方法：通过牛津杯法对三种不同浓度的连霉药液对三种医院感染的常见细菌的抑制作用得出最优抑菌浓度。结果：通过细菌实验得出0.057g/mL的连霉药液对铜绿假单胞菌有极敏的抑制作用，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌有中度敏感的抑制作用；0.0285g/mL的连霉药液对铜铝假单胞菌有极敏的抑制作用，对金黄色葡萄球菌有中度敏感的抑制作用，对大肠杆菌无抑制作用；0.0143g/mL的连霉药液对铜铝假单胞菌有中度敏感的抑制作用，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌无抑制作用。结论：连霉药液在临床应用中以1mL中含有0.057g原药材的浓度对细菌的抑制作用最强，与实际应用相符。
关键词：连霉药液；抑菌作用；牛津杯法
连霉药液在肛肠领域应用历史悠久，具有抗菌、消炎、止痛、止血作用。但其制作工艺，药物配比及各种药物煎熬顺序和时间都有独特的考究，现代运用领域广泛，其中最重要的功效是抗菌、消炎作用，故我们本课题研究重点是在保持传统制作工艺的基础上重点研究其抑菌、消炎作用，即研究连霉药液对肛肠病术后的常见致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等的抑制和杀灭作用，使连霉药液的医学运用领域更加广泛【1】。
1材料和方法
1.1试验药液 浓度分别为0.057g/mL、0.0285g/mL、0.0143g/mL的连霉药液（方中中药为成都市吉安康药业有限公司提供）。
1.2受试菌种 金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、大肠埃希菌（ATCC25922）（由四川省人民医院微生物实验室提供）。
1.3仪器设备
培养箱BB5060uv（规格060480314CE 法国HERAAUES），生物安全柜HFsafa1200（规格0106QST0025 上海博迅），MH琼脂平板。（规格：90mm.郑州安图生物工程股份有限公司），梅里埃电子比浊仪DENSIMAT（M004120 法国梅里埃），牛津杯（规格6mm×8mm×10mm 无误差型 南京创分仪器有限公司）。
1.4方法
1.4.1药液制备
精密称取处方中黄连、栀子等七味药共计1336g，将黄连和栀子合煎三次，第一次加入10000mL水，沸腾之后再煎煮0.5h，濾过，第二次和第三次分别加入8000mL水，合并三次滤液，趁热加入明矾，搅拌使其溶解，倒入瓦缸中静置2天（不密闭），然后加入麝香、食盐、冰片、硼砂四味药搅拌静置，此时药液浓度相当于1mL含原药材0.057g，待药液表面生长出薄层灰白色的连霉菌并全部覆盖药液方可使用。
缓慢拨开白色连霉菌，精密吸取药液60mL，等分为三份，每份20mL，用蒸馏水等比稀释成浓度为0.057g/mL、0.0285g/mL、0.0143g/mL的三个浓度梯度，不密闭静置待用。
1.4.2牛津杯法测定抑菌作用大小【2】
1.4.2.1分别挑取待检菌（金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌）悬于3ml生理盐水中，混匀后用比浊仪调整浊度为0.5个麦氏单位。
1.4.2.2用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液，用棉拭子涂布整个M-H（90mm）培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边两圈，保证涂布均匀。
1.4.2. 3在涂好菌液的培养基上均匀放置4个牛津杯并轻压，注意杯间距及杯与平板边缘的距离。用加样枪吸取同一个浓度的连霉液200?L于4个牛津杯中。
1.4.2.4将平板放于35℃孵箱中，孵育18-24小时后取出，对光从背面测量抑菌环的接近的整数毫米数纪录，并求出抑菌环的平均值。
1.4.3药物敏感试验判定标准【2】
表1 药物敏感试验判定标准
抑菌环直径（mm） 敏感度
20以上 极敏
15-20 高敏
10-14 中敏
10以下 低敏
0 不敏
2试验结果
表2 细菌试验结果
药物浓度 针对试验细菌的抑菌环大小（mm）
铜绿假单胞菌 平均值 金黄色葡萄球菌 平均值 大肠埃
希菌 平均值
0.057g/mL 27 25.25 15 14 11 12.25
25 14 13
26 14 13
23 13 12
0.029g/mL 20 21.25 12 10.5 0 0
21 10 0
22 10 0
22 10 0
0.0143g/mL 15 13.75 0 0 0 0
13 0 0
14 0 0
13 0 0
3结论
通过细菌实验得出0.057g/mL的连霉药液对铜绿假单胞菌有极敏的抑制作用，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌有中度敏感的抑制作用；0.0285g/mL的连霉药液对铜铝假单胞菌有极敏的抑制作用，对金黄色葡萄球菌有中度敏感的抑制作用，对大肠杆菌无抑制作用；0.0143g/mL的连霉药液对铜铝假单胞菌有中度敏感的抑制作用，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌无抑制作用。
4讨论
连霉药液运用广泛，尤其在肛肠疾病领域方面的使用已有100多年历史，其清热解毒、抑菌抗炎、消肿镇痛、收敛止血的功效在临床运用中已得到反复印证，得到了全国同行专家的一致认同，目前最主要应用于肛肠疾病的感染炎症期，急、慢性直肠结肠炎的灌肠治疗等。肛肠疾病形成的原因很多，局部的感染是很重要的一个诱因。由于肛肠解剖学的特殊性，使这个区域术后经常被污染，直接影响伤口的愈合和导致大便出血、大便困难、肛门坠胀、伤口水肿等术后并发症。所以痔科术后对术区炎症的治疗非常重要，直接影响病人伤口愈合以及对医疗质量的满意度【3】
本实验所得结果与预期结果有一定差异，分析原因可能是在样品运输过程中必须密闭，同时在试验过程中为避免环境中其他细菌的干扰而必须进行无菌操作，减弱或消除了药液发酵作用，使其抑菌效果有所减弱。
在实验过程中抑菌环内有少许黄色斑点，分析原因可能是因为连霉药液本身为发酵制剂，药液中具有治疗作用的微生物，具体原因和机理有待进一步的研究。
参考文献：
[1]苏亚非.中西医结合运用黄济川精选方剂的临床体会[J].第十届中国中西医结合学会大肠肛门病学术研讨会大会交流论文
[2]钱存柔，黄仪秀.微生物学实验教程[M].北京：北京大学出版社，2000，207，208
[3]廖治先，黄安清.黄氏连霉液灌肠在痔科术后应用观察[J].中华中医药学刊，2008，9（26）：368-369
关键词：连霉药液；抑菌作用；牛津杯法
连霉药液在肛肠领域应用历史悠久，具有抗菌、消炎、止痛、止血作用。但其制作工艺，药物配比及各种药物煎熬顺序和时间都有独特的考究，现代运用领域广泛，其中最重要的功效是抗菌、消炎作用，故我们本课题研究重点是在保持传统制作工艺的基础上重点研究其抑菌、消炎作用，即研究连霉药液对肛肠病术后的常见致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等的抑制和杀灭作用，使连霉药液的医学运用领域更加广泛【1】。
1材料和方法
1.1试验药液 浓度分别为0.057g/mL、0.0285g/mL、0.0143g/mL的连霉药液（方中中药为成都市吉安康药业有限公司提供）。
1.2受试菌种 金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、大肠埃希菌（ATCC25922）（由四川省人民医院微生物实验室提供）。
1.3仪器设备
培养箱BB5060uv（规格060480314CE 法国HERAAUES），生物安全柜HFsafa1200（规格0106QST0025 上海博迅），MH琼脂平板。（规格：90mm.郑州安图生物工程股份有限公司），梅里埃电子比浊仪DENSIMAT（M004120 法国梅里埃），牛津杯（规格6mm×8mm×10mm 无误差型 南京创分仪器有限公司）。
1.4方法
1.4.1药液制备
精密称取处方中黄连、栀子等七味药共计1336g，将黄连和栀子合煎三次，第一次加入10000mL水，沸腾之后再煎煮0.5h，濾过，第二次和第三次分别加入8000mL水，合并三次滤液，趁热加入明矾，搅拌使其溶解，倒入瓦缸中静置2天（不密闭），然后加入麝香、食盐、冰片、硼砂四味药搅拌静置，此时药液浓度相当于1mL含原药材0.057g，待药液表面生长出薄层灰白色的连霉菌并全部覆盖药液方可使用。
缓慢拨开白色连霉菌，精密吸取药液60mL，等分为三份，每份20mL，用蒸馏水等比稀释成浓度为0.057g/mL、0.0285g/mL、0.0143g/mL的三个浓度梯度，不密闭静置待用。
1.4.2牛津杯法测定抑菌作用大小【2】
1.4.2.1分别挑取待检菌（金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌）悬于3ml生理盐水中，混匀后用比浊仪调整浊度为0.5个麦氏单位。
1.4.2.2用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液，用棉拭子涂布整个M-H（90mm）培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边两圈，保证涂布均匀。
1.4.2. 3在涂好菌液的培养基上均匀放置4个牛津杯并轻压，注意杯间距及杯与平板边缘的距离。用加样枪吸取同一个浓度的连霉液200?L于4个牛津杯中。
1.4.2.4将平板放于35℃孵箱中，孵育18-24小时后取出，对光从背面测量抑菌环的接近的整数毫米数纪录，并求出抑菌环的平均值。
1.4.3药物敏感试验判定标准【2】
表1 药物敏感试验判定标准
抑菌环直径（mm） 敏感度
20以上 极敏
15-20 高敏
10-14 中敏
10以下 低敏
0 不敏
2试验结果
表2 细菌试验结果
药物浓度 针对试验细菌的抑菌环大小（mm）
铜绿假单胞菌 平均值 金黄色葡萄球菌 平均值 大肠埃
希菌 平均值
0.057g/mL 27 25.25 15 14 11 12.25
25 14 13
26 14 13
23 13 12
0.029g/mL 20 21.25 12 10.5 0 0
21 10 0
22 10 0
22 10 0
0.0143g/mL 15 13.75 0 0 0 0
13 0 0
14 0 0
13 0 0
3结论
通过细菌实验得出0.057g/mL的连霉药液对铜绿假单胞菌有极敏的抑制作用，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌有中度敏感的抑制作用；0.0285g/mL的连霉药液对铜铝假单胞菌有极敏的抑制作用，对金黄色葡萄球菌有中度敏感的抑制作用，对大肠杆菌无抑制作用；0.0143g/mL的连霉药液对铜铝假单胞菌有中度敏感的抑制作用，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌无抑制作用。
4讨论
连霉药液运用广泛，尤其在肛肠疾病领域方面的使用已有100多年历史，其清热解毒、抑菌抗炎、消肿镇痛、收敛止血的功效在临床运用中已得到反复印证，得到了全国同行专家的一致认同，目前最主要应用于肛肠疾病的感染炎症期，急、慢性直肠结肠炎的灌肠治疗等。肛肠疾病形成的原因很多，局部的感染是很重要的一个诱因。由于肛肠解剖学的特殊性，使这个区域术后经常被污染，直接影响伤口的愈合和导致大便出血、大便困难、肛门坠胀、伤口水肿等术后并发症。所以痔科术后对术区炎症的治疗非常重要，直接影响病人伤口愈合以及对医疗质量的满意度【3】
本实验所得结果与预期结果有一定差异，分析原因可能是在样品运输过程中必须密闭，同时在试验过程中为避免环境中其他细菌的干扰而必须进行无菌操作，减弱或消除了药液发酵作用，使其抑菌效果有所减弱。
在实验过程中抑菌环内有少许黄色斑点，分析原因可能是因为连霉药液本身为发酵制剂，药液中具有治疗作用的微生物，具体原因和机理有待进一步的研究。
参考文献：
[1]苏亚非.中西医结合运用黄济川精选方剂的临床体会[J].第十届中国中西医结合学会大肠肛门病学术研讨会大会交流论文
[2]钱存柔，黄仪秀.微生物学实验教程[M].北京：北京大学出版社，2000，207，208
[3]廖治先，黄安清.黄氏连霉液灌肠在痔科术后应用观察[J].中华中医药学刊，2008，9（26）：368-369