Salsolinol合成酶的高效液相色谱-电化学活性检测方法研究

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Salsolinol合成酶是一种催化多巴胺(DA)和乙醛(AcH)生成Salsolinol的酶,它在内源性儿茶酚异喹啉类物质代谢过程中起重要作用。研究显示该类物质具有一定的神经毒性,与帕金森病(PD)发病机制密切相关,因此Salsolinol合成酶可能是PD的一种关键致病因子。本文从雄性SD大鼠鼠脑中分离得到Salsolinol合成酶的粗酶液,采用高效液相色谱结合电化学检测器体系(HPLC-ECD)建立了一套灵敏度高、重复性较好的酶活检测方法,并进行了方法稳定性和灵敏度的验证,方法简便、稳定,适用于不同生物样品中该酶活性的测定;同时也将该方法应用于超滤分离后不同截留分子量样品的活性测定,结果显示该酶的活性主要集中在3K下层滤液。 Salsolinol synthase is an enzyme that catalyzes the formation of Salsolinol by dopamine (DA) and acetaldehyde (AcH), which plays an important role in the metabolism of endogenous catechol isoquinolines. Studies have shown that these substances have some neurotoxicity, and Parkinson’s disease (PD) is closely related to the pathogenesis, so Salsolinol synthase may be a PD of a key risk factor. In this paper, the crude enzyme solution of Salsolinol synthase was isolated from the brain of male SD rats and a set of high sensitivity and repeatability enzyme activity assay was established by HPLC-ECD with high performance liquid chromatography (HPLC-ECD) The method is simple, stable and suitable for the determination of the enzyme activity in different biological samples. The method is also applied to the determination of the activity of different molecular weight cut-off samples after ultrafiltration separation. The results The activity of this enzyme was shown to be mainly concentrated in the 3K lower filtrate.
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